68Ga-citrate對軟組織感染PET-CT顯像基因表達分子機制與驗證

徐婷婷，江 飛，傅文會，陳 躍

1.西南醫科大學附屬醫院核醫學科（瀘州646000）；2.核醫學與分子影像四川省重點實驗室（瀘州646000）；3.西南醫科大學核醫學研究所（瀘州 646000）

感染病灶迅速準確的定性與定位診斷對感染患者的臨床正確處置至關重要。放射性核素顯像是實現感染病灶早期診斷的重要手段之一[1]。正電子核素68Ga與citrate 標記制成顯像劑成功應用于各類疾病，包括各種感染的PET-CT 顯像[2-16]，但68Ga-citrate 炎癥顯像機制并未完全清楚。在對軟組織感染進行顯像時，68Ga在膿腫處攝取明顯[17]，而有研究證實尾靜脈注射68GaCl3后在軟組織感染處幾乎沒有68Ga 攝取[18]，這說明了檸檬酸在68Ga-citrate顯像的分子機制中可能發揮了一定的作用。本研究首次用熒光定量PCR調查感染小鼠68Ga-citrate 炎癥顯像機制中相關轉鐵蛋白TF基因Trf、轉鐵蛋白受體TFRC基因Tfrc和乳鐵蛋白TLF基因Ttf的表達，同時鑒定mMATE1轉運子基因Slc47a1的表達，結合阻斷實驗和PET-CT 顯像，探討68Gacitrate感染顯像的可能機制。

1 材料和方法

1.1 實驗材料、試劑和設備

68Ge/68Ga 發生器購自德國ITG（Isotope Technologies Garching GmbH）公司。用0.05 M 超純HCl 洗脫發生器獲得68GaCl3。胰蛋白胨大豆肉湯購自北京酷來搏科技有限公司，胰蛋白胨大豆瓊脂購自北京百奧萊博科技有限公司，2-（膦?；谆┪於幔?-PMPA），乙胺嘧啶和檸檬酸鈉購自阿拉?。ㄉ虾＃┰噭┯邢薰?，ITLC-SG 薄層層析紙購自GE 公司；耐甲氧西林金黃色葡萄球菌ATCC43300購自北納創聯生物科技有限公司；CRC-55tRxing 放射性核素活度計購自Capintec公司。

1.2 實驗動物

7周齡SPF級ICR雄性小鼠27只，購自成都達碩實驗動物有限公司。本實驗經西南醫科大學實驗動物倫理委員會批準。

1.3 68Ga標記檸檬酸與檢測

先配制0.1 M 的檸檬酸鈉。用4 mL 0.05 M HCl 淋洗68Ge-68Ga 發生器，取中間2 mL；按1 mCi68Ga∶100 μL 0.1 M 檸檬酸鈉的比例混合反應液，加入無菌水至500 μL，常溫下反應20 min；過除菌濾膜（Merck，vented Millex-GS，0.22 μm）。

紙層析TLC 檢測標記率。使用ITLC-SG 為固定相，標記產物點樣后，以甲醇∶1 M 醋酸鈉（1∶1，v/v）為流動相鑒定標記產物的放射性化學純度。

1.4 炎癥小鼠模型的建立與取樣

取活化后的金黃色葡萄球菌至新的NB 肉汁培養基中，37 ℃200 rpm震蕩培養過夜，再取培養后的金黃色葡萄球菌至新的NB 中37 ℃200 rpm 震蕩培養2 h，用PBS 緩沖液重懸至OD600=0.6。取金黃色葡萄球菌5×105cfu（菌落形成單位），用胰島素針注射至左腿排腸肌處，注射后分別在0、1、12和96 h時間點用手術刀取注射處或感染處組織，液氮速凍，-80 ℃保存備用。

1.5 RNA提取、反轉錄成cDNA、PCR檢測和實時熒光定量PCR

用 實 時 熒 光 定 量PCR 鑒 定 基 因Trfc、Trf、Ttf、Slc47a3和SLC3A5的表達。TFRC 是轉鐵蛋白受體，結合Fe的轉鐵蛋白TF會和轉鐵蛋白受體結合，通過細胞內化進入到細胞中[19]。68Ga-citrate 通過尾靜脈注射進入小鼠體內后，作為Fe的類似物68Ga會和TF以及乳鐵蛋白TLF 結合[6，8-9]，多藥及毒性化合物外排轉運子1（multidrug and toxin extrusion1，MATE1）可能參與轉運檸檬酸的外排[19-20]，預計TF 基因Trf、TLF 基因Ttf表達量會增高，因而轉鐵蛋白受體基因表達會增高，小鼠mMATE1 基因Slc47a1表達量也會增高，NaCT 是Na+耦聯的檸檬酸內向轉運子[20]，選用此轉運子基因SLC13A5作為基因Slc47a1的陰性對照。

按照RNeasy MicroKit 試劑盒（RNA 微量提取試劑盒，QIAGEN，Germany）提供的方法提取RNA。使用Nano Photometer 分光光度計（IMPLENCN，USA）測定RNA純度和濃度，用變性瓊脂糖凝膠電泳測定RNA的完整性。

使用強效SYBR Green Cells-to-CT?試劑盒（Thermofisher）反轉錄所取組織的RNA，使用1 μg RNA 和Oligo（dT）反轉錄成cDNA，對cDNA 用actaα基因進行檢測，PCR程序為95 ℃預變性3 min；然后95 ℃1 min，53 ℃30 s，72 ℃30 s，30個循環；最后72 ℃延伸5 min。引物為：F：ATCTTCCGCCTTAATACT，R：GCCTTCATACATCAAGTT。按照試劑盒提供的方法熒光定量PCR測定Slc47a1、Tfrc、Trf、SLC13A5和Tlf基因的表達，以小鼠肌動蛋白基因actaα為內參基因。熒光定量PCR 程序為：93 ℃預變性2 min；然后93 ℃1 min，55 ℃1 min，72 ℃1 min，40 個循環；最后72 ℃延伸7 min。各基因引物為：

1.6 炎癥模型和阻斷實驗小鼠的PET-CT顯像

取金黃色葡萄球菌5×105cfu 注射至ICR 小鼠的左后腿處，4 d后形成膿腫[17-18]。形成膿腫1 d后，尾靜脈注射68Ga-citrate 至炎癥小鼠，使用西門子Inveon MM Gantry STDCT PET-CT 60 min 后行PET-CT 顯 像；采用相同方法，以68GaCl3作為68Ga-citrate 的對照，將68GaCl3注射至炎癥小鼠行PET-CT 顯像；以正常小鼠作為炎癥小鼠的對照，將68Ga-citrate 注射至正常小鼠行PET-CT顯像。阻斷實驗中，mMATE1阻斷劑乙胺嘧啶溶于體積比為90∶5∶5 的生理鹽水、乙醇和TWeen80溶液中，通過尾靜脈按每只炎癥小鼠20 μmol/kg 的量注入乙胺嘧啶，1 d 后注入68Ga-citrate（15 MBq），60 min 后行PET-CT 顯像。用mMATE1 非阻斷劑2-PMPA 作為對照，將2-PMPA 溶于生理鹽水中，通過尾靜脈按每只炎癥小鼠20 μmol/kg 的量注入2-PMPA，1 d 后注入68Ga-citrate（15 MBq），60 min 后行PET-CT 顯像?？偣?組實驗，每組實驗的小鼠數量為3，在同一天進行。使用西門子Inveon Research Workplace 分析軟件通過感興趣區計算感染損傷部位、對照組織、心臟、膀胱的SUVmax。

1.7 統計學分析

使用IBM SPSS 21.0 和GraphPad Prism 8.0 進行數據分析。數據表示為均數±標準差（），兩個樣本均數比較采用t檢驗，多個樣本均數比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA），兩兩比較采用LSD 法，P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 68Ga標記檸檬酸和放射化學純度測定

用洗脫下來較高濃度的68Ga（中間2 mL）標記檸檬酸，室溫下反應20 min。以ITLC-SG 為固定相，甲醇∶醋酸鈉（1∶1，v/v）為流動相進行薄層層析分析測定放射化學純度。結果表明檸檬酸的68Ga 的標記率達到99%，68Ga-citrate 在前沿30 mm，保留分數（retention fraction）Rf=1，見圖1A，而直接洗脫的68Ga 在前沿10 mm，Rf 值為0.3，見圖1B。標記結果表明從68Ge/68Ga發生器上直接洗脫下來的68Ga在室溫下就可以直接標記檸檬酸。放化純和產率都比較高，且只需過除菌濾膜，無需進行其它處理。

圖1 68Ga-citrate放射化學純度測定Figure 1 Radiochemical purity of 68Ga-citrate

2.2 小鼠感染組織的RNA提取與反轉錄

用金黃色葡萄球菌感染小鼠左后腿，分別在0、1、12 和96 h 取樣，用RNeasy MicroKit 試劑盒提取小鼠感染組織的RNA，分光光度計測得所提RNA 的OD260/OD280的比值均在1.9～2.2 之間，OD260/OD230的比值均在2.0～2.3之間，純度較好，符合要求。變性瓊脂糖凝膠電泳檢測完整度表明RNA3個條帶清晰可見，18S條帶亮度約為28S 條帶的1/2，因而RNA 完整度較好，見圖2A。取1 μg RNA反轉錄成cDNA，用actin肌動蛋白基因actaα檢測cDNA，PCR擴增的條帶約為296 bp，結果符合預期，因而cDNA可以用于下游的熒光定量PCR實驗，見圖2B。

圖2 RNA檢測完整性和cDNA檢測Figure 2 RNA and cDNA test

2.3 68Ga-citrate PET-CT 炎癥顯像機制相關基因的實時熒光定量PCR檢測

用金黃色葡萄球菌注射小鼠，在不同時間點取樣（方法1.4），對68Ga-citrate PET-CT 炎癥顯像機制中相關基因Trf、Ttf、Tfrc和mMATE1 轉運子基因Slc47a1在感染處的表達量用實時熒光定量PCR 進行鑒定。Tfrc基因在1 h時間點的表達量最高（1 091.36±30.76），該基因在0 h時間點表達量也很高（290.84±10.62），兩者有極顯著性差異（t=52.08；P＜0.01），見圖3A。其它預計表達量增加的Trf基因和Ttf基因在感染誘導的后期高表達，Trf在感染誘導96 h 時高表達（57.21 ±11.62），而Ttf在感染誘導的12 h 即開始高表達（43.03±6.8），見圖3B，表達量與各自的0 h 小時時間點相比均有極顯著性差異（t=35.35，t=12.05，P＜0.01），與預期的也比較相符。而mMATE1 基因Slc47a1的表達量在1 h 時也增強（28.79 ± 2.16），與0 h 時間點表達量（8.21±1.23）相比有極顯著差異（t=8.22，P＜0.01），與Na+耦聯的檸檬酸內向轉運子NaCT基因表達量相比也有極顯著的差異（1.67 ± 0.51，t=8.22，P＜0.01）（圖3B）。NaCT 基因SLC13A5在所有時間點都低表達，受感染誘導的基因表達都有一個特點，即轉運子基因在感染誘導的初期表達，而非轉運子基因Trf和Ttf在感染后期誘導表達（圖3）。

圖3 熒光定量PCR鑒定68Ga-citrate炎癥顯像機制相關基因表達Figure 3 Identification of related gene expression for 68Ga-citrate inflammation imaging using real-time PCR

2.4 PET-CT對mMATE1轉運子功能的驗證

為了對mMATE1轉運子在感染中可能的功能進行驗證，按照方法1.6 進行各處理組的PET-CT 顯像。如圖4 所示，方差分析表明各處理方式對尾靜脈注射68Ga-citrate 后68Ga在小鼠左后腿相應部位的聚集有顯著性影響（F-檢驗，P＜0.01），見表1，在炎癥小鼠中可見在左后腿注射部位有明顯的68Ga 聚集（圖4A，圖5，表1），在正常小鼠相應部位未見明顯的68Ga聚集（圖4E，圖5，表1），二者差異具有統計學意義（表1），未注射的右腿也未見明顯的68Ga聚集（圖4E，圖5，表1），除了左后腿處理部位外，炎癥小鼠中68Ga 主要在膀胱聚集，而正常小鼠中可見68Ga 主要在心臟和膀胱處聚集（圖4E，表1）。用mMATE1 轉運子抑制劑乙胺嘧啶阻斷炎癥小鼠mMATE1 轉運子后行PET-CT 顯像，可以觀察到68Ga在注射部位聚集明顯減少（圖4 B，表1），與未阻斷炎癥小鼠（圖4A）相比有顯著性差異（圖4 B，表1），且68Ga 在心臟部位聚集明顯增多（圖4 A、4B，表1）。而用類似的方法，用PSMA阻斷劑2-PMPA處理感染小鼠，行PET-CT 顯像未見68Ga 明顯減少，與乙胺嘧啶阻斷相比有顯著性差異，與未阻斷炎癥小鼠相比沒有顯著性差異（圖4B、4C，圖5，表1），且二者在心臟和膀胱處的聚焦也沒有顯著性差異（圖4A、4C，表1）。用68GaCl3尾靜脈注射炎癥小鼠在感染部位并未見明顯的68Ga聚集，68Ga主要在心臟部位聚集（圖4D，表1），所以可以判斷炎癥小鼠模型構建成功，68Ga-citrate 對金葡菌誘導的感染顯像效果較好，GaCl3對金葡菌誘導的感染顯像效果較差，mMATE1 轉運子對注射68Gacitrate 顯像劑后造成的68Ga 在感染部位的富集可能發揮了一定的作用。

表1 尾靜脈注射68Ga-citrate或68GaCl3各處理小鼠相應部位的SUVmax（，n=3）Table 1 SUVmax of corresponding parts or organs from mice receiving68Ga-citrate or 68GaCl3（，n=3）

表1 尾靜脈注射68Ga-citrate或68GaCl3各處理小鼠相應部位的SUVmax（，n=3）Table 1 SUVmax of corresponding parts or organs from mice receiving68Ga-citrate or 68GaCl3（，n=3）

注：PYR：乙胺嘧啶；a表示與炎癥小鼠+68Ga-citrate組比較，P ＜0.05；b 表示與炎癥小鼠+PYR+68Ga-citrate 組比較，P ＜0.05；c 表示與炎癥小鼠+PMPA+68Ga-citrate 組比較，P ＜0.05；d 表示與正常小鼠+68Ga-citrate組比較，P ＜0.05。

圖4 炎癥小鼠和正常小鼠的PET-CT顯像Figure 4 PET-CT imaging of healthy mice and inflammed mice

圖5 注射68Ga-citrate或68GaCl3至炎癥小鼠或正常小鼠各處理組左后腿相應部位SUVmax值Figure 5 SUVmax value of left hind legs in respective treatment after injection of 68Ga-citrate or68GaCl3 into inflammatory or normal mice

3 討論

3.1 檸檬酸與68Ga-citrate炎癥顯像機制可能的關系

檸檬酸是一種有機殺菌劑，可對引起干腐病的鐮刀菌（Fusarium sulphureum）起到抑制作用[21]。細菌的生存都需要一個特定的pH，檸檬酸的酸性可以改變細胞內的pH值并影響細菌的正常代謝，同為三羧酸循環中的中間產物琥珀酸具有抑制金黃色葡萄球菌的能力，這暗示了檸檬酸可能也具有抑制金黃色葡萄球菌的能力。檸檬酸具有收縮、增固毛細管，降低通透性，提高凝血功能及血小板數量的作用，可縮短凝血時間和出血時間，這些功能與炎癥反應相反。高粱（Sorghum bicolor）在受到鋁毒脅迫時，在外排機制中，可由轉運子MATE 分泌出檸檬酸以絡合有毒的鋁離子，阻止其進入細胞內從而避免植物根細胞遭受鋁毒脅迫[22]。人類的hMATE1 基因主要在肝和腎中表達，hMATE1 是H+耦聯的電中性轉運子，定位在泌尿小管和膽汁小管的腔膜上，介導有毒有機陽離子轉運進入尿和膽汁中。小鼠mMATE1 基因Slc47a1除了在腎和肝上表達外，也在腦神經膠質細胞、毛細血管、胰腺管細胞和膀胱上皮等位置表達，表明mMATE1 除了從機體中轉運有毒有機陽離子之外，也可能涉及到多種生物學功能[20]。因而推測轉運子MATE 可能轉運68Gacitrate，在68Ga-citrate 的感染顯像中發揮了一定的作用。

3.2 68Ga-citrate的標記及PET-CT顯像

68Ga的半衰期為68 min，能量為2.92 MeV，具有較高的能量和易定量的特征。68Ga每單位的劑量是2.6×10-2mSv/MBq，無論是在半衰期、輻射劑量、檢測的靈敏度，還是在診斷疾病的廣度和潛力上，68Ga-citrate都要優于67Ga-citrate[3-16]。68Ga 前處理比較繁雜，從68Ge-68Ga發生器上淋洗下來的68Ga 的純化需要陽離子交換樹脂，80%丙酮鹽酸去除金屬雜質，98%丙酮鹽酸純化和加熱煮沸。68Ga 的半衰期比較短，其繁雜的純化過程必然會降低68Ga-citrate 的產量，王玲等[17]用68Ga 和檸檬酸鈉直接反應，產物過濾膜調pH值至4，結果表明標記產物68Ga-citrate能夠很好的對金黃色葡萄球菌誘導的感染進行PET-CT 顯像，且不同時間點的PET-CT 顯像結果顯示膿腫處于75 min 攝取顯像劑最多，不同時間點的正常Balb/c 裸鼠顯像結果顯示68Ga 在膀胱處攝取最多，心臟次之。而本研究中的標記方法也是采用直接標記法，且不用調節pH值，方法更加簡單易行，標記產物同樣能對金黃色葡萄球菌誘導的感染進行PET-CT 顯像（圖4A）。檸檬酸是三羧酸類化合物，含有三個羧基，酸性較強，檸檬酸電離后的主要存在形式和pH值有關，pH值在7左右時，檸檬酸全部電離成citrate3-，容易與68Ga3+形成配位鍵且不易解離。故本研究中標記產物沒有調節pH值，反應體系的pH值在6左右，恰好是檸檬酸易于絡合68Ga3+的酸堿度。

3.3 Tfrc、Trf、Ttf和Slc471基因在感染處的表達

臨床上各炎癥顯像劑的顯像機制已得到部分闡明[23]。67Ga/68Ga-citrate 作為炎癥病灶顯像劑在臨床應用已有幾十年的歷史，但其機制并未完全闡明，炎癥病灶67Ga/68Ga-citrate顯像劑攝取增高機制可能是多種機制的共同作用結果，除了血供增加、血管通透性增加、代謝增高、腫脹導致的病灶回流降低（淋巴及血液回流）之外，還包括轉鐵蛋白轉運和白細胞富集導致的乳鐵蛋白在炎癥病灶處富集等。當pH 值在7.4 左右，轉鐵蛋白TF 會與Fe3+結合形成Fe-TF 復合體，Fe-TF 可靶向轉鐵蛋白受體TFRC，通過細胞內吞作用進入胞內，而在酸性條件下，Fe3+會從Fe-TF 復合體上解離下來。TFRC 在需要大量鐵的癌細胞，破骨細胞，激活的淋巴細胞和有核紅細胞上高表達。67Ga作為Fe的類似物，在血液中同樣會和TF結合，通過TFRC介導的細胞內吞作用在各種實體瘤上富集[24]。但也有研究指出67Ga-TF是通過非特異性的結合在腫瘤細胞上富集，而非通過TFRC 介導的細胞內吞作用[25]。68Ga-citrate尾靜脈注射炎癥小鼠后，68Ga 會和轉鐵蛋白TF 結合，到達炎癥處，由于pH 值降低，68Ga-TF 發生解離，68Ga會和結合力更強的乳鐵蛋白TLF結合[23，26-27]，乳鐵蛋白也是轉鐵蛋白家族中的一員，所有的乳鐵蛋白都有相同的鐵結合位點，相較于TF，在更低的pH 值條件下也能結合Fe。有研究指出67Ga在炎癥處的富集是由于遷移到炎癥處的白細胞釋放的乳鐵蛋白結合67Ga 造成的[19]。故推測TF 和TLF 對應的基因在炎癥處會高表達，而68Ga-TF 復合體會結合到轉鐵蛋白受體TFRC上，進一步推測TFRC 基因Tfrc在炎癥處也會高表達，我們用熒光定量PCR 技術鑒定這些基因的表達量，首次從分子水平上證實了這些基因受到感染誘導而高表達。且在上述所有基因中Tfrc基因在感染部位受促炎因子誘導表達量最高，且在0 h 時間點表達量也很高（圖3A）這表明了轉鐵蛋白受體是持家基因，有重要的生物學功能，在感染形成的初期會被誘導大量表達，印證了在感染處轉鐵蛋白受體TFRC 會和68Ga-TF 結合，形成68Ga-citrate 炎癥顯像分子機制之一。mMATE1基因Slc47a1受感染誘導在1 h 左右高表達，顯著高于同時間點的NaCT 基因SLC13A5的表達，這暗示了mMATE1轉運子可能參與炎癥顯像機制。轉運子基因在感染初期被誘導，非轉運子基因后期被誘導表達的可能原因是轉運子隨著感染的形成逐漸在感染部位先組裝好，感染后期TF 和TLF 基因被誘導表達，與相應的轉運子相互作用，以對感染做出應答。

3.4 mMATE1轉運子可能參與對感染的應答

人類MATE1基因有兩個成員hMATE1和hMATE2，hMATE1主要在肝、腎和骨骼肌上表達，hMATE2主要在腎上表達。小鼠的mMATE1 蛋白和人類的hMATE1蛋白序列相似性高達78.1%，表明了小鼠的mMATE1轉運子和人類的hMATE1在表達部位和轉運特性上都較為相似。mMATE1 除了在肝和腎中高表達之外，一個顯著的特點就是在導管和腔體的表皮細胞上高表達[20]。在有機陽離子被位于腎小管和肝細胞上的有機陽離子轉運子（organic cation transporter，OCT）轉運進細胞后，mMATE1 轉運子在糖蛋白的配合下將有機陽離子轉運至體外，即mMATE1 轉運子轉運有機陽離子是介導有機陽離子轉運出細胞的最后一步[20]。本研究首次證實mMATE轉運子基因Slc47a3受金葡菌感染誘導表達，阻斷實驗表明mMATE1 轉運子可能參與感染應答。mMATE1是H+偶聯的反向轉運子，感染處pH值降低，這可能為mMATE1 轉運68Ga-citrate 或其它68Ga復合物至感染處提供驅動力。68GaCl3尾靜脈注射進炎癥小鼠后，在感染部位68Ga聚集較少，主要積聚在心臟處，這可能說明了68GaCl3不能作為mMATE1 的底物而在感染處聚集。但是和68GaCl3在未處理部位相比，SUVmax值卻有明顯差異（圖4D，表1，t檢驗，P＜0.05），說明血管通透性增加的確是炎癥顯像機制之一。各處理組中，68GaCl3注射進炎癥小鼠體內后主要在心臟中聚焦，而在膀胱中聚集比較少，動態顯像也證實了這一點[18]，而68Ga-citrate 注射進炎癥小鼠或正常小鼠體內后在膀胱聚集比較多，說明mMATE1 與68Ga-citrate 注射進小鼠體內后68Ga 在膀胱處聚焦可能有一定的關系。mMATE1 在感染處早期被誘導表達后，推測在感染部位組裝，具體的組裝部位可能在圍繞膿腫腔體壁的細胞膜上，為轉運68Ga-citrate 或其它有機陽離子做準備。本研究鑒定了SLC13 轉運子家族成員NaCT 的基因SLC13A5的表達，與mMATE1不同，NaCT是Na+耦聯的內向的檸檬酸轉運子，對pH值敏感。鑒定結果表明NaCT 轉運子基因SLC13A5在任何時間點的表達量都維持在本底水平（圖3），可能的原因：一是該轉運子的驅動力是Na+，二是該轉運子轉運方向是向細胞內，與機體對感染的應答無關。這進一步驗證了了mMATE1轉運子在炎癥處可能的功能。阻斷實驗證實mMATE1被阻斷，注射68Ga-citrate 后，感染處仍然有相當量的68Ga（表1，圖5）攝取，這表明mMATE1轉運子在感染處可能的功能是炎癥顯像多種機制之一。綜上，我們得出mMATE1轉運子在68Ga-citrate炎癥顯像機制中可能參與的功能是：68Ga-citrate 注射體內后，部分通過毛細血管內皮連接處滲漏進炎癥組織，可能由有機陽離子轉運子OCT將其轉運至圍繞在膿腫的腔體細胞內，再由mMATE1轉運子將其轉運至膿腫處，對膿腫起到抑制作用或其它生物學功能。

3.5 本研究的不足之處

本研究在為熒光定量PCR 鑒定相關基因表達進行取樣時，前期所設時間點較少，這可能捕捉不到mMATE1 基因Slc47a1或TFRC 基因Tfrc表達的最高值，相較于Tfrc，Slc47a1在前期的最大表達量較小可能與此有關系。另外，沒有取每個時間點的未感染組織作為對照，而只用注射后0 h 代替未感染組織，也可能有一定的誤差。

4 結論

本研究首次用熒光定量PCR 技術鑒定了與68Gacitrate 炎癥顯像機制密切相關的轉鐵蛋白受體TFRC基因Tfrc、轉鐵蛋白TF基因Trf和乳鐵蛋白TLF基因Ttf在感染處的表達，證實了Tfrc、Trf、Ttf在感染處高表達，多藥及毒性化合物外排轉運子mMATE1 基因Slc47a1也受細菌感染誘導高表達。阻斷實驗使用PET-CT 技術證實了mMATE1轉運子在68Ga-citrate炎癥顯像中可能有一定的功能，即與有機陽離子轉運子OCT 配合，將68Ga-citrate轉運至膿腫處行使相應的生物學功能。