β-乳球蛋白與紅曲色素非共價相互作用及其對色素穩定性的影響

趙 楠, 李秉桓, 宋宇寧, 韓 釗, 武淑芬,*

(1.天津科技大學 食品科學與工程學院, 天津 300457; 2.天津蘭瑞生物科技有限公司, 天津 300384)

紅曲色素(monascus pigments,Mps)是由紅曲霉屬的絲狀真菌在代謝過程中產生的次級代謝產物,是聚酮類化合物的混合物[1]。目前已被廣泛研究和應用的有6種醇溶性Mps,包括兩種黃色素,即紅曲素(monascin)(Y1)和安卡紅曲黃素(ankaflavin)(Y2);兩種橙色素,即紅斑紅曲素(rubropunctatin)(O1)和紅曲玉紅素(monascorubrin)(O2);兩種紅色素,即紅斑紅曲胺(rubropunctamine)(R1)和紅曲玉紅胺(monascrubramine)(R2)[2]。這些色素分子化學結構相似,不同色素組分通常以混合物的形式存在于發酵產物中。由于分離難度大、成本高,Mps大多以混合物的形式應用于食品工業[3]。Mps通常作為食品著色劑應用于肉制品、調味品、面制品等食品工業,Mps還具有抗炎、抑菌、防腐、抗氧化、抗癌等生理活性[1,4]。然而,Mps對溫度和光照敏感,穩定性較差,同時在不同pH值條件下溶解性也存在較大差異,限制了其在食品領域的應用[5-7]。

β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,β-LG),是存在于大多數反芻動物乳中的一種球狀蛋白質,分子質量為18.3 kDa,由162個氨基酸殘基構成,等電點pI約為5.2[8-9]。β-LG也是牛乳清蛋白中的主要成分,其含量大約占乳清蛋白的50%[10]。β-LG是由8個反平行的β-折疊鏈組成的β-桶狀結構,又稱calyx結構,該結構易與疏水性小分子結合,是配體結合的潛在位點[11]。研究表明,β-LG與配體之間的結合,不僅受配體自身性質的影響,還受外界環境因素的影響,因為β-LG的結構會隨溶液pH值的變化而改變[12]。在生理條件下,反芻動物中的β-LG一般以二聚體形式存在;而當pH值小于3.0時,β-LG主要以單體形式存在;當pH值在3.5～5.5時,β-LG二聚體則轉變為八聚體[13];當pH值大于7.4時,β-LG由二聚體解離為單體[14]。借助β-LG獨特的構象變化機制,可實現多種疏水活性成分溶解性、穩定性及生物可及性的提高[15-16]。Zagury等[17]制備了表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)與β-LG復合物,顯著提高了EGCG的穩定性、抗氧化活性及體內生物利用度。Abdollahi等[18-19]分別研究了香草酸在酸性(pH值為2.4)和中性(pH值為7.2)條件下與β-LG的相互作用,為香草酸在酸性食品和中性乳制品中的應用提供了理論參考。Wang等[20]探究了在pH值為7.0和8.1的條件下,β-LG與番茄紅素之間的結合情況,發現當pH值為8.1時,配合物具有更穩定的結構。Zhu等[21]發現,β-LG與芹菜素在pH值為6.2時形成的復合物親和力強且穩定性高。

蛋白質與小分子之間的相互作用會影響食品的風味、顏色和營養功能的變化,以蛋白質作為載體可用于改善食品功能因子的物理性質,同時使復合物表現出更優的生理活性[22-23]。β-LG是一種很好的生物大分子載體,Mps作為一種脂溶性小分子,其光和熱不穩定性限制了其在食品領域的應用,目前有關β-LG作為壁材包載Mps的研究尚未見報道。本研究擬在不同pH值條件下,研究 β-LG 與Mps之間的相互作用,利用熒光光譜和圓二色譜,分析β-LG與Mps的結合行為,并采用分子對接技術探究β-LG與Mps的結合機制,對β-LG&Mps復合物的抗氧化活性、熱穩定性和光穩定性進行評價。本研究旨在為增強Mps的穩定性,拓寬Mps應用領域提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

β-乳球蛋白(β-LG)、1,1-二苯基-2-苦基肼(DPPH),上海源葉生物科技有限公司;Mps提取物(1 031.25 U/g),實驗室自制;無水乙醇,天津市江天化工技術股份有限公司;無水磷酸氫二鈉、無水磷酸二氫鈉,上海易恩化學技術有限公司;鹽酸,國藥集團化學試劑有限公司。實驗所用試劑均為分析純,所有試劑配制及實驗用水均為超純水。

1.2 儀器與設備

SQP型天平,賽多利斯科學儀器(北京)有限公司;SevenEasy型實驗室pH計,梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司;UV-Vis型紫外-可見分光光度計,美國安捷倫公司;F-2500型熒光分光光度計,日本日立公司;MOS-450型圓二色譜儀,法國Bio-Logic公司;Infinite M200 PRO型酶標儀,瑞士Tecan公司;DF-101S型集熱式磁力加熱攪拌器,江蘇金怡儀器科技有限公司;HPG-280HX型人工氣候箱,哈爾濱市東聯電子技術開發有限公司;TES-1339型照度計,泰仕電子工業股份有限公司。

1.3 實驗方法

1.3.1β-LG與Mps復合物的制備

1) β-LG溶液制備。準確稱取10 mg的β-LG粉末,分別溶于0.1 mol/L pH值為2.6、6.2、7.1、8.2的磷酸鹽緩沖液(PBS)中,在室溫條件下渦旋1～2 min,使其充分溶解,置于4 ℃冰箱過夜,使蛋白質充分水合。依據β-LG的消光系數(ε278 nm=17.6 mol·mL-1·cm-1)[21],對β-LG溶液進行稀釋,即得到濃度為100 μmol/L的β-LG溶液,置于4 ℃ 冰箱待用。

2) Mps溶液制備。稱取一定量的Mps粉末,溶于無水乙醇中,在室溫下渦旋1～2 min,超聲處理2～3 min,攪拌至充分溶解,得到質量濃度為6.4 mg/mL的色素母液,避光保存、待用。

3) β-LG和Mps混合溶液制備。分別取β-LG溶液與Mps溶液混合,得到pH值為2.6、6.2、7.1、8.2的混合溶液,使得β-LG的終濃度固定為10 μmol/L,Mps的終質量濃度為0.004、0.008、0.016、0.032、0.064 mg/mL。將配制好的溶液混合均勻,室溫下靜置30 min,待二者充分結合后進行測定。各體系中無水乙醇體積分數不超過3%,以消除乙醇對蛋白質的誘導變性[24]。

1.3.2β-LG熒光光譜測定

在室溫條件下,使用熒光分光光度計測定蛋白的熒光光譜,記錄隨著pH值與Mps質量濃度的改變,β-LG內在熒光光譜的變化情況。設定激發波長為295 nm,掃描波長為300～450 nm,激發和發射狹縫寬度均為2.5 nm。以不含β-LG的同等質量濃度的Mps溶液體系的熒光光譜作為背景,以扣除Mps自身熒光光譜的干擾。

1.3.3β-LG二級結構含量測定

用圓二色譜儀在室溫下分別分析不同pH值和不同Mps質量濃度條件下β-LG二級結構含量變化情況。β-LG溶液的濃度固定為10 μmol/L,Mps質量濃度設定為0.004 mg/mL和0.032 mg/mL。測量波長為200～260 nm,石英比色皿厚度為0.1 cm, 步長1 nm。所有樣品掃描3次取平均值。利用CDNN軟件對圓二色譜數據進行處理,計算β-LG各二級結構的相對含量。

1.3.4分子對接

β-LG的晶體結構分別從PDB(蛋白質數據庫)(http:∥www.rcsb.org)下載,pH值為2.6、6.2、7.1、8.2混合溶液的PDB編號依次為1DV9、3BLG、1BSY和2BLG[21]。通過AutoDock軟件對β-LG進行加氫、去除水分子等處理以生成不同pH值的β-LG的PDBQT文件。Mps分子的3D結構從小分子數據庫(https:∥pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)下載,其中R2的分子結構需要利用ChemBioDraw軟件繪圖后,再通過Chem 3D軟件生成3D結構,然后對其進行能量最小化處理,并用OpenBabel軟件進行格式轉換,生成可供對接的PDBQT文件。利用AutoDock vina軟件進行盲對接,并用Pymol和Discovery Studio 2017 R2 Client軟件進行可視化分析。

1.3.5抗氧化活性測定

參考趙煥焦[10]的方法,稍加修改。稱取3.95 mg 的DPPH粉末溶解于100 mL的無水乙醇中,配制成濃度為100 μmol/L的DPPH工作液。按照1.3.1中方法制備β-LG&Mps溶液,使復合物體系中β-LG的終濃度為10 μmol/L,Mps終質量濃度分別為0.004、0.008、0.016、0.032、0.064 mg/mL。 避光靜置20 min,使二者充分反應,然后向樣品組加入100 μL的DPPH工作液,對照組加入100 μL的無水乙醇,空白組以相應PBS代替樣品,混勻后避光反應30 min,使用酶標儀于517 nm處測定吸光度值,并根據式(1)計算DPPH自由基清除率。

(1)

式(1)中,A0為空白組的吸光度,A1為對照組的吸光度,A2為樣品組的吸光度。

1.3.6熱穩定性分析

按照1.3.1中方法制備β-LG&Mps復合物溶液,使復合物體系中β-LG終濃度為40 μmol/L,Mps終質量濃度為0.048 mg/mL。量取2 mL樣品溶液,分別置于4 ℃冰箱,于25 ℃和50 ℃磁力加熱攪拌器內避光孵育。以相同質量濃度的Mps溶液作為對照,每間隔2 h取樣一次,測定樣品在410 nm處的吸光度(An)。每個樣品設置3組平行,取平均值進行計算。將每組樣品的初始吸光度記為A初,保留率設為100%,按式(2)進行計算。

(2)

式(2)中,An為第n小時吸光度,A初為樣品初始吸光度。

1.3.7光穩定性分析

按照1.3.1中方法制備β-LG&Mps溶液,使復合物體系中β-LG終濃度為40 μmol/L,Mps終質量濃度為0.048 mg/mL。量取2 mL樣品溶液,分別置于25 ℃,光照強度為600 Lux和避光條件下孵育。以相同質量濃度的Mps溶液作為對照,每間隔12 h取樣一次,測定樣品在410 nm處的吸光度。每個樣品設置3組平行,取平均值進行計算。將每組樣品的初始吸光度記為A初,保留率設為100%,按式(2)進行計算。

1.4 數據處理

采用Excel 2010軟件進行數據處理,用Origin 2022軟件對數據進行分析和繪圖。所有實驗設置3個平行,重復測定2次,結果用平均值±標準差表示,并用IBM SPSS Statistics 26.0軟件進行顯著性分析,P<0.05表示差異顯著。

2 結果與討論

2.1 不同pH值條件下Mps與β-LG結合行為分析

2.1.1Mps的結合對β-LG內源熒光光譜的影響

由于蛋白質內源熒光易受蛋白分子微環境的影響,因此可通過測定蛋白質熒光強度的變化,來推斷蛋白質是否與小分子之間發生了結合作用。對不同pH值、不同Mps質量濃度條件下β-LG內源熒光光譜的分析結果如圖1。由圖1可知,當激發波長為295 nm時,β-LG在337 nm附近有強吸收峰,且隨著Mps質量濃度的增加,β-LG的固有熒光強度逐漸降低,在4個實驗pH值范圍內均發生了熒光猝滅,這表明Mps和β-LG之間發生了相互作用。此外,不同pH值條件下β-LG固有熒光性質不同。當pH值由2.6提高到8.2時,β-LG自身熒光強度增大,這表明β-LG所處微環境的極性改變,熒光發色基團由親水環境向疏水環境轉移[25]。同時,隨著Mps質量濃度增大,β-LG的熒光強度逐漸降低,在Mps質量濃度增大到0.064 mg/mL時,Mps對β-LG熒光猝滅強度可通過猝滅率表示,見式(3)。

β-LG為10 μmol/L,Mps后括號內數字表示Mps質量濃度,單位為mg/mL。

(3)

式(3)中,A0和A1分別為β-LG和β-LG&Mps的熒光強度最大值。

根據式(3)計算,在不同pH值條件下,Mps對β-LG的猝滅率分別為74.7%(pH值2.6),94.2%(pH值6.2),97.2%(pH值7.1)和97.4%(pH值8.2)。這可能與β-LG在不同pH值條件下的結構存在差異有關[26]。

2.1.2Mps的結合對β-LG二級結構的影響

圓二色譜被廣泛應用于蛋白質二級結構的分析。為了進一步分析在不同pH值條件下Mps的結合對β-LG二級結構的影響,測定了在4個實驗pH值范圍內,β-LG同Mps結合前后的圓二色譜,如圖2。由圖2可見,圓二色譜在216 nm處有一個大的負峰,這是β-折疊結構的特征峰,表明β-LG主要是由β-折疊組成的蛋白質[27]。隨著Mps的加入,負峰強度有所降低,使β-LG的二級結構發生輕微變化,但譜圖中的峰形沒有明顯改變,說明β-LG與Mps結合后仍保持較為穩定的結構。

β-LG為10 μmol/L,Mps后括號內數字表示Mps質量濃度,單位為mg/mL。

為了進一步量化蛋白質二級結構含量,通過CDNN軟件對樣品的二級結構進行計算,結果如表1。當β-LG與Mps結合后,α-螺旋含量略有降低,β-折疊含量增加,且β-轉角和無規則卷曲含量變化不大。這表明與Mps結合后,β-LG的結構沒有發生顯著改變,即沒有明顯松弛或展開[21,28]。

表1 不同pH值條件下Mps添加對β-LG二級結構的影響

2.1.3Mps與β-LG分子對接結果分析

據報道,β-LG上存在4個潛在的活性位點,供其與配體結合,包括β-桶狀結構的內部疏水空腔、α-螺旋和β-桶狀結構之間的表面疏水口袋、靠近Trp19至Arg124處的外表面以及二聚體界面[21, 29]。而PDB中所下載的β-LG的晶體結構并不包含配體的結構信息,無法確定其最佳結合位點。因此,為了預測6種Mps分子在β-LG上的結合位點,采用盲對接方式進行模擬分析。在利用AutoDock vina軟件運行20次對接后,生成的Mps分子構象按照對接結合能的大小進行排序,在每個pH值下選擇結合能最低的對接構象來預測其結合位點。6種Mps分子和β-LG分子的結構及對接結果如圖3至圖7。

圖3 6種Mps分子和β-LG分子結構Fig.3 Structure of six Mps and β-LG

由圖4(a)至圖7(a)可知,在同一pH值條件下,6種Mps分子與β-LG的同一區域相結合,這可能是因為Mps分子結構具有相似性。從圖4(a)可知,在pH值為2.6時,EF Loop處于閉合狀態,6種Mps分子主要結合在D鏈和E鏈附近的外表面。由圖5(a)可知,在pH值為6.2時,EF Loop仍處于閉合狀態,6種Mps分子主要結合在A鏈和B鏈附近的外表面,這表明β-LG 結構中Trp19至Arg124附近的外表面是6種Mps分子結合的一個主要位點。而當pH值大于7.0時,EF所形成的Loop打開,使得配體能夠進入疏水空腔內的結合位點[25]。由圖6(a)和圖7(a)可知,在pH值為7.1和8.2時,6種Mps分子主要結合在β-桶狀結構的開口端位置,這表明在中性以及偏堿性環境中,β-桶狀結構的疏水空腔是6種Mps分子的主要結合位點。圖4(b)至圖7(b)分別顯示了β-LG的氨基酸殘基與Mps分子結合的相互作用力。在不同pH值條件下,6種Mps分子與β-LG的結合區域相互靠近,而參與結合作用的氨基酸殘基不同,同時維持復合物的相互作用力均涉及范德華力、疏水相互作用和氫鍵。由圖4(b)可見,在pH值為2.6時,只有一種Mps分子即R2與β-LG的Leu87形成了一個碳氫鍵;由圖5(b)可見,在pH值為6.2時,每種Mps分子均與β-LG之間形成氫鍵,參與氫鍵形成的主要氨基酸有Gly52、Lys75、Thr76和Lle12等;由圖6(b)可見,在pH值為7.1時,除了O1未與β-LG形成氫鍵,其他分子均形成2個以上氫鍵,參與氫鍵形成的主要氨基酸殘基有Asn109、Asn90和Asn88等;由圖7(b)可見,在pH值為8.2時,Mps分子與β-LG之間形成的氫鍵數量為1～4個,參與結合的氨基酸殘基有Asn88、Asn90、Ser116、Lys69和Lys60。除了氫鍵以外,疏水相互作用也是主要驅動力,包括烷基、π-烷基、π-σ等。本研究結果表明,β-LG 與Mps之間能夠形成非共價復合物,且Mps能夠結合到β-LG的疏水空腔上,但在pH值為2.6條件下形成的氫鍵數量較少,而在pH值為6.2、7.1、8.2條件下形成的氫鍵數量較多,這可能對復合物的穩定性產生影響。

圖4 pH值為2.6時6種Mps分子與β-LG分子的對接結果Fig.4 Docking results of β-LG with six Mps at pH 2.6

圖5 pH值為6.2時6種Mps分子與β-LG分子的對接結果Fig.5 Docking results of β-LG with six Mps at pH 6.2

圖6 pH值為7.1時6種Mps分子與β-LG分子的對接結果Fig.6 Docking results of β-LG with six Mps at pH 7.1

2.2 不同pH值條件下β-LG&Mps的抗氧化性及穩定性分析

2.2.1抗氧化性分析

DPPH在乙醇溶液中呈現紫色,在517 nm處有特征吸收峰,當存在抗氧化活性成分時,其溶液顏色變淺,吸光度值降低,表明DPPH自由基被部分清除。因此,通過測定DPPH吸光值可對樣品的抗氧化能力進行定量分析。分別測定了pH值為2.6、6.2、7.1和8.2時,β-LG與Mps及二者復合后對DPPH自由基的清除能力,實驗結果如圖8。由圖8可見,在相同蛋白濃度、不同pH值條件下,β-LG(10 μmol/L)的DPPH自由基清除率分別為13%、19%、22%和16%,表明β-LG在中性環境中清除DPPH自由基的能力更強。隨著復合物中Mps質量濃度從0.004 mg/mL增加到0.064 mg/mL,復合物的抗氧化能力也顯著增強(P<0.05),并呈濃度依賴性,這表明高質量濃度的Mps,對復合物DPPH自由基清除能力的影響更為顯著。

β-LG為10 μmol/L,Mps和β-LG&Mps后括號內數字表示Mps質量濃度,單位為mg/mL。不同小寫字母表示DPPH自由基清除率差異顯著(P<0.05)。

當Mps質量濃度達到0.064 mg/mL,在pH值為6.2和7.1時,復合物的DPPH自由基清除能力顯著高于未復合的Mps(P<0.05);而在pH值為2.6和8.2時差異不顯著(P>0.05)。這表明,復合物抗氧化能力的強弱主要與Mps自身抗氧化能力密切相關。在pH值為2.6、6.2和7.1時,復合物的DPPH自由基清除率達到了90%以上,而在pH值為8.2時,復合物的自由基清除率為51%。這可能是由于Mps中紅色素和橙色素具有很強的抗氧化活性,對DPPH自由基的清除能力要強于黃色素組分,而在弱堿性環境中,紅色素和橙色素在高pH值條件下自身結構不穩定,黃色素較為穩定[30-31]。雖然復合物的抗氧化能力比單獨的β-LG和相應質量濃度的Mps強,但小于兩者抗氧化能力的總和,表明兩者之間產生了拮抗作用,這可能是由于Mps分子結構中的某些基團與β-LG發生非共價相互作用,從而使復合物的抗氧化能力減弱[32]。

2.2.2熱穩定性分析

由于Mps中紅、橙、黃色素都在400 nm左右有較高的吸光值,通常選用410 nm處的吸光度來表示色素濃度[31]。本實驗通過測定410 nm處吸光度值的變化來計算Mps的保留率,以此對熱穩定性進行評價。測定了4、25、50 ℃時,復合物中的Mps和未復合的Mps保留率,實驗結果如圖9。由圖9可知,在不同pH值條件下,復合物中Mps的保留率均高于未復合的Mps,這表明Mps與β-LG復合后熱穩定性的提高。由圖9(a)可知,在pH值為2.6,溫度為4 ℃和 25 ℃ 時,復合物中的Mps和未復合的Mps在10 h內均發生快速降解,復合物中Mps的保留率為59.1%和54.3%,未復合的Mps的保留率則為36.3%和32.7%。

由圖9(a)和(b)可知,在溫度為50 ℃,pH值為2.6或6.2時,復合物在前2 h內發生快速降解,隨著加熱時間延長,吸光度值變大,保留率增加。這可能是由于在強酸條件下,Mps發色團遭到破壞,結構發生變化,從而使溶液的顏色發生轉變[33],導致吸光度增大。這表明,色素在酸性條件下不穩定,該結果與分子對接結果一致。圖4(b)的分子對接結果顯示,在pH值為2.6時,Mps與β-LG形成非共價復合物時生成的氫鍵數量較少,這使得復合物的穩定性較差,因而形成的復合物對Mps的保護作用較弱。由圖9(b)、(c)、(d)可知,在pH值為6.2、7.1、8.2時,溫度為50 ℃的條件下,復合物中Mps的保留率均高于未復合的Mps,分別提高了58%、30%和24%,這表明Mps與β-LG復合后熱穩定性提高,在 10 h 內幾乎沒有損失。由圖9(b)可知,對于未復合的Mps,在pH值為6.2時,3個溫度下均發生快速降解,4 ℃和25 ℃下保留率在60%左右,50 ℃下保留率為42%;由圖9(c)和(d)可知,在pH值為7.1和8.2時,4 ℃下的保留率能夠保持在90%以上,而25 ℃和50 ℃加熱條件下,Mps的穩定性雖然沒有在4 ℃時的穩定性好,但保留率也能夠保持在70%以上。因此,本研究表明,Mps能夠在接近中性環境下與β-LG形成穩定的非共價復合物,且熱穩定性良好。

2.2.3光穩定性分析

測定了Mps與β-LG復合前與復合后的光穩定性,設定光照條件為600 Lux和避光,溫度為25 ℃,實驗結果如圖10。由圖10可知,在光照強度為 600 Lux 條件下,未復合的Mps在12 h內快速降解。隨著時間的延長,在光照60 h,Mps的保留率分別下降至16.8%、22.1%、31.7%和39%,這表明Mps在光照條件下不穩定。避光條件下未復合的Mps的保留率雖高于光照條件,但都低于復合物中Mps的保留率,說明復合物的形成可改善Mps的光不穩定性。

圖10 不同pH值和光照條件下Mps及β-LG&Mps的穩定性變化Fig.10 Stability of Mps and β-LG&Mps under different light conditions at different pH values

由圖10(b)、(c)、(d)可知,在pH值為6.2、7.1、8.2時,復合物中Mps在避光和光照條件下損失較少,仍具有較高的保留率。由圖10(b)、(c)、(d)可知,在光照36 h后,復合物中Mps的保留率分別提高了65%、43%和43%。對于復合物中的Mps,在pH值為6.2、7.1和8.2時,放置36 h后,保留率增大這一現象,可能是由于長時間放置,復合物溶液的顏色發生變化,較剛反應時顏色偏紅;隨著pH值的升高,顏色轉變更為明顯,這可能是由于混合物中橙色素的內酯鍵斷裂以及生色團上的共軛雙鍵發生重排導致的[31]。陳莎等[34]對紅曲橙、黃色素穩定性的研究發現了相似的現象,在pH值為5～9時,紅曲黃色素和紅曲橙色素的顏色較pH值為 2～4時明顯偏紅。有研究發現,pH值大于6的環境,有助于使紅曲橙色素發生親氨反應生成紅曲紅色素[35-36]?？傮w而言,非共價復合物的形成對Mps的光穩定性起到了有效的保護作用。

3 結 論

本研究表明,在實驗的pH值范圍內,β-LG與Mps之間可以通過非共價相互作用形成穩定的復合物。Mps所引起的β-LG內源熒光猝滅,證實了β-LG&Mps的形成,Mps與β-LG的相互作用使β-LG的二級結構發生輕微變化,且兩者主要借助范德華力、疏水相互作用以及氫鍵進行非共價結合。與未復合的Mps相比,復合物中Mps的熱穩定性和光穩定性均顯著提高。本研究結果旨在為Mps穩態化研究提供理論依據,為基于β-LG的Mps產品在功能性食品開發中的應用提供有益參考。后期可利用β-LG為載體,通過單因素實驗優化形成復合物的條件,并對復合物的其他功能特性進行探究,為提高色素的生物利用度提供理論支撐。