梔子苷立方液晶凝膠的制備、表征及體外評價

歐陽威 黃星雨 王旭易 駱慧婷 李爽 譚穎 顏紅

〔摘要〕 目的 為促進水溶性梔子苷的透皮性能而制備梔子苷立方液晶凝膠（geniposide cubic liquid crystal gel， GE-CLC-G），并對其進行表征及體外評價。方法 以甘油單油酸酯（glyceryl monooleate，GMO）為基質材料，采用注入法制備GE-CLC-G，通過三元相圖篩選出空白立方液晶區域；采用單因素法優選GE-CLC-G的處方及工藝條件；建立梔子苷的HPLC含量測定方法；采用偏光顯微鏡（polarizing microscope，PLM）、小角X衍射儀（small angle X diffraction，SAXS）對產品進行表征；采用改良Franz擴散池，比較GE-CLC-G與梔子苷軟膏的體外透皮特性；采用DHR-2流變儀，對比GE-CLC-G和梔子苷軟膏的流變學性質。結果 優選的GE-CLC-G處方及工藝為GMO∶無水乙醇∶水＝64∶3∶33，1%梔子苷投藥量，1%促滲劑（氮酮：丙二醇=1∶1），60 ℃渦旋3 min，25 ℃恒溫箱密封、避光3 d。制得的GE-CLC-G為無色、澄明的凝膠狀半固體；為立方相，其內部結構為雙菱形（Pn3m）晶格；測得產品中梔子苷的含量為（9.94±0.02） mg/g，載藥量較大，符合立方液晶的特點。含1%促滲劑的GE-CLC-G 24 h累積透皮率Q（%）和透皮速率常數Js明顯高于不加促滲劑的梔子苷軟膏和不加促滲劑的GE-CLC-G。流變學研究表明，GE-CLC-G屬于非牛頓流體，生物黏附性好，結構更穩定。結論 GE-CLC-G制備工藝簡單，產品外觀良好，PLM和SAXS可用于表征立方液晶凝膠，含量測定方法操作簡單，專屬性好；GE-CLC-G的體外透皮性能和流變學性質均明顯優于梔子苷軟膏。

〔關鍵詞〕 立方液晶凝膠；梔子苷；三元相圖；體外透皮；流變學

〔中圖分類號〕R283.6? ? ? ? ?〔文獻標志碼〕A? ? ? ? ? 〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674－070X.２０24.01.006

Preparation， characterization， and in vitro evaluation of

geniposide cubic liquid crystal gel

OUYANG Wei1， HUANG Xingyu2， WANG Xuyi1， LUO Huiting1， LI Shuang1， TAN Ying1， YAN Hong1*

1. Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410208， China; 2. Gongyi People's Hospital，

Zhengzhou， Henan 451200， China

〔Ａｂｓｔｒａｃｔ〕 Objective To prepare geniposide cubic liquid crystal gel （GE-CLC-G） and characterize and evaluate it in vitro， so as to enhance the transdermal performance of the water-soluble geniposide （GE）. Methods Glyceryl monooleate （GMO） was used as the substrate material to prepare GE-CLC-G by injection method; the blank cubic crystal area was screened out by ternary phase diagram; the prescription and process conditions of GE-CLC-G were optimized by single factor method; the HPLC method for the determination of GE content was established. The product was characterized by polarizing microscope （PLM） and small angle X diffraction （SAXS）. Modified Franz diffusion cell was used to compare the in vitro transdermal properties of GE-CLC-G and GE ointment， and DHR-2 rheometer was adopted to compare the rheological properties of GE-CLC-G and GE ointment. Results The optimal prescription and process of GE-CLC-G were as follows： GMO： anhydrous ethanol∶ water=64∶3∶33， 1% GE dosage， 1% penetration enhancer （azone∶ propylene glycol=1∶1）， vortex at 60 ℃ for 3 min， sealed and avoiding light in a constant temperature box at 25 ℃ for 3 d. The obtained GE-CLC-G was colorless and clarified gel-like semi-solid; it was a cubic phase and its internal structure was a double diamond （Pn3m） lattice; the content of GE in the measured product was （9.94±0.02） mg/g， with a large drug load， which corresponded with the characteristics of cubic liquid crystal. The 24 h cumulative transdermal rate Q （%） and transdermal rate constant Js of GE-CLC-G containing 1% penetration enhancer were significantly higher than those of GE ointment and GE-CLC-G without penetration enhancer. Rheological studies showed that GE-CLC-G was a non-Newtonian fluid， with good bioadhesion and more stable structure. Conclusion The preparation process of GE-CLC-G is simple， the product appearance is fine; PLM and SAXS can be used to characterize cubic liquid crystal gel， and the content determination method is easy to operate， with good exclusiveness; the in vitro transdermal performance and rheological properties of GE-CLC-G are significantly better than GE ointment.

〔Ｋｅｙｗｏｒｄｓ〕 cubic liquid crystal gel; geniposide; ternary phase diagram; in vitro transdermal penetration; rheology

梔子苷（geniposide，GE）是茜草科植物梔子Gardenia jasminoides Ellis的主要活性成分，是一類環烯醚萜苷類化合物?，F代藥理學研究表明，梔子苷可影響多條細胞信號通路，降低炎癥因子表達，并通過激活免疫細胞產生抗炎作用[1-2]，梔子苷還可通過激動阿片受體和抑制一氧化氮的合成和釋放而產生鎮痛作用[3]。臨床中已有多例采用梔子外敷配合口服給藥治療關節炎的療效報道[4-6]，但梔子苷水溶性較強，脂溶性弱，經皮滲透能力較差，目前尚未見治療關節炎的梔子苷外用制劑上市。傳統治療關節炎的中藥經皮制劑多為散劑、糊劑、軟膏劑等，普遍存在黏著力差、藥末易散落、透皮效果不佳、使用不方便等缺點。因此，探索生物相容性好、性能優良的梔子苷外用制劑具有一定的研究意義。

立方液晶凝膠是一類由兩親性脂質分子分散在水或其他極性溶劑中自發締合形成的含雙連續水通道和脂質通道的閉合脂質雙分子層“蜂窩狀”結構的立方液晶體系，能同時增溶親水、親脂及兩親性分子[7-8]，其具有較好的促滲性能以及生物黏附性，使用方便且生物可降解，是一種新型的藥物載體，在經皮給藥制劑研發中具有良好的應用前景。本實驗以甘油單油酸酯（glyceryl monooleate，GMO）/無水乙醇（anhydrous ethanol，ET）/水為體系，開展梔子苷立方液晶凝膠（geniposide cubic liquid crystal gel，GE-CLC-G）的制備、表征、體外透皮特性及流變學的研究，本研究可改善梔子苷的透皮性能，提高藥物的生物利用度，為用于治療關節炎的新型中藥經皮制劑的開發提供參考依據。

1 材料與動物

1.1? 材料

梔子苷對照品（批號：110749-201718，中國食品藥品檢定研究院，純度97.6%）；梔子苷原料藥（批號：BLT20170815，西安博聯特化工有限公司，純度為96.3%）；甘油單油酸酯（批號：116703，丹麥丹尼斯克公司惠贈）；甲醇（批號：3HG0013，美國斯百全公司，純度：99.9%）；乙腈（批號：21125090，美國天地公司，純度：99.9%）；辛癸酸甘油三酯（批號：119393001100，廣州良吉化工有限公司）；氮酮（批號：C10611463，上海麥克林生化科技股份有限公司）；正辛醇（批號：20170413）、無水乙醇（批號：20221116）、丙二醇（批號：20201027）、十八醇（批號：20160606）、油酸（批號：20200729）、單硬脂酸甘油酯（批號：20171202）、甘油（批號：20171101）均購自國藥集團化學試劑有限公司，蒸餾水與純化水為實驗室自制。

1.2? 儀器

AVANCE Ⅲ HD 600 MHz核磁共振波譜儀（瑞士bruker公司）；Waters 2489高效液相色譜儀（美國Waters公司）；AR11401C型電子天平（奧豪斯國際貿易有限公司）；CHA-S氣浴恒溫振蕩器（常州國華電器有限公司）；XW-80A旋渦混合器（上海青浦滬西儀器廠）；LEICA DM2700P偏光顯微鏡（北京同舟同德儀器儀表有限公司）；SAXSess mc2小角X衍射儀（奧地利Anton Paar公司）；ZNCL-G磁力攪拌器（河南愛博特科技發展有限公司）；Franz擴散池（鞏義市英谷予華儀器廠）；H3-20KR臺式高速冷凍離心機（湖南可成儀器設備有限公司）；DHR-2流變儀（美國TA公司），pH-100計（上海力辰邦西儀器科技有限公司）。

1.3? 動物

雄性SD大鼠，SPF級，體質量（180±20） g，湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，合格證號：SCXK-（湘）2016-0002。實驗動物使用場地合格證號SYXK（湘）2013-0005。

2 方法與結果

2.1? 梔子苷含量測定的方法學研究

2.1.1? 色譜條件? 色譜柱為Hypersil GOLD aQ C18（250 mm×4.6 mm，5.0 μm）；流動相為乙腈∶水（15∶85）；檢測波長238 nm；流速1.0 mL/min；柱溫35 ℃；進樣量10 μL。

2.1.2? 對照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液的制備? 精密稱取梔子苷標準品0.010 0 g，置于10 mL棕色容量瓶中，加入甲醇定容，超聲5 min，即得1 mg/mL的母液。吸取0.9 mL母液，加至10 mL棕色容量瓶中，加入甲醇定容，即得濃度為90 μg/mL的對照品溶液。精密稱取GE-CLC-G 0.100 0 g，置于10 mL棕色容量瓶中，加入甲醇定容，超聲5 min，過0.45 μm微孔濾膜，即得供試品溶液。按立方液晶凝膠制備方法，制備不含梔子苷的陰性凝膠，按供試品溶液的制備方法制備，得到陰性樣品溶液。

2.1.3? 專屬性試驗? 取對照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液各10 μL，按“2.1.1”項下色譜條件分析測定，結果表明GE-CLC-G中其他輔料對梔子苷含量測定無干擾，說明該方法專屬性良好，分離度均大于1.5，理論塔板數均在4500以上，見圖1。

2.1.4? 線性關系的考察? 分別精密移取上述對照品溶液一定體積，分別用甲醇稀釋成濃度為11.25、22.5、45、90、180、360 μg/mL的對照品溶液，按“2.1.1”項色譜條件進行檢測，記錄峰面積。梔子苷峰面積積分值與濃度線性回歸方程：Y=14 282X-28 964（r=0.999 6），梔子苷的質量濃度在11.25～360 μg/mL內線性關系良好。

2.1.5? 精密度試驗? 取質量濃度為11.25、45、180 μg/mL的對照品溶液，按“2.1.1”項色譜條件1 d內連續進樣5次，計算日內精密度；每天固定時間點測定1次，連續測定5 d，計算日間精密度。結果表明，日內精密度RSD分別為0.83%、0.55%、0.61%，日間精密度RSD分別為0.94%、1.35%、0.61%，表明儀器精密度良好。

2.1.6? 穩定性試驗? 取同一供試品溶液，于配制后0、2、4、8、12、24 h按“2.1.1”項下色譜條件進樣檢測，記錄峰面積，RSD值為0.43%，表明供試品溶液在24 h內穩定性良好。

2.1.7? 重復性試驗? 精密稱取0.1 g GE-CLC-G，按“2.1.2”項制備6份供試品溶液，按“2.1.1”項下色譜條件進行檢測，結果表明梔子苷濃度的RSD值為0.86%，表明該方法重復性良好。

2.1.8? 加樣回收試驗? 精密稱取9 份0.1 g已知含量的GE-CLC-G，分別精密吸取其樣品含量的80%、100%、120%的梔子苷對照溶液，按“2.1.2”項下方法制備3份，進樣測定，計算平均回收率。結果表明梔子苷平均加樣回收率為99.49%，RSD值為1.80%。

2.2? GE-CLC-G的制備

本實驗以GMO為基質材料，采用注入法制備GE-CLC-G；通過GMO-ET-水三元相圖設計處方，制備空白立方液晶凝膠，并通過外觀及偏光顯微鏡（polarizing microscope，PLM）觀察，篩選出空白立方液晶區域；在此基礎上采用單因素法考察水浴溫度、渦旋時間、投藥量對制備工藝的影響；并以產品的外觀和載藥量為指標，結合PLM、小角X衍射儀（small angle X diffraction，SAXS）對產品表征，篩選得到最佳GMO-ET-水的比例；采用體外透皮實驗，以累積滲透量、穩態透皮速率等為指標，優選了促滲劑的種類及配比；并對以上優化的處方及工藝進行驗證。

2.2.1? 三元相圖的繪制與空白立方液晶區域的篩選? 將GMO/ET/水體系設計81個不同比例的處方，采用Origin 8.0軟件進行三元相圖的繪制，篩選空白立方液晶區域。

按質量比1∶9、2∶8、3∶7、4∶6、5∶5、6∶4、7∶3、8∶2、9∶1 的比例稱取適量的GMO與ET，將兩者混合均勻，得油相。在固定GMO與ET比的情況下，按質量比1∶9、2∶8、3∶7、4∶6、5∶5、6∶4、7∶3、8∶2、9∶1的比例精密稱取不同比例油相和純化水（水相）制成2 g（w/w）的樣品，置于60 ℃水浴溫度下加熱，待兩相加熱至60 ℃，趁熱將油相緩慢滴加至水相，邊加邊渦旋3 min，隨后密封、避光置于25 ℃恒溫箱中放置3 d即得。GMO∶ET＝1∶9的處方設計見表1。

目測法觀察以上所制得的81個樣品的外觀和性狀發現，樣品可分為溶液、固液兩相（乳狀液）和凝膠3類，選取固液兩相和凝膠樣品進一步在PLM下觀察其偏光性質。參考文獻可知，液晶凝膠常分為六角液晶、立方液晶和層狀液晶3種，光學性質由其內部結構決定，光學各向同性即不具有光學雙折射性是立方液晶獨有的特性，這使得它在PLM下為暗視野，見圖2B。根據偏光顯微圖的結果，采用Origin 8.0軟件繪制三元相圖，標識出立方液晶區域，三元相圖中（圖3）的2區即為篩選的空白立方液晶區域（GMO∶ET∶水為32∶8∶60至63∶7∶30）。

2.2.2? GE-CLC-G的處方及工藝優化? 在篩選出空白立方液晶區域的基礎上，采用單因素法考察水浴溫度、渦旋時間、梔子苷投藥量、GMO/ET/水的比例以及促滲劑對實驗結果的影響，優選GE-CLC-G的處方及工藝條件。梔子苷易溶于水[9]，故將處方量的梔子苷在純化水中溶解作為水相。

2.2.2.1? 水浴溫度的考察? 基質GMO的熔融溫度為（45±2） ℃，ET沸點為78.4 ℃，分別設置40、50、60、70、80 ℃等5個水浴溫度，以凝膠的外觀性狀為指標進行考察，并結合已篩選的空白立液晶凝膠區域，固定GMO∶ET∶水的比例為64∶2∶34，梔子苷的加入量為1.0%、渦旋4 min。結果發現在40、50、60、70、80 ℃制得的凝膠，其性狀分別為白色渾濁、白色略渾濁、澄清透明、白色霧化狀、白色霧化狀。進一步考察55、60、65 ℃ 3個水浴溫度，60、65 ℃形成的凝膠均無色澄清透明，55 ℃成白色渾濁凝膠，綜合以上結果及能源節約，選擇60 ℃作為水浴溫度。

2.2.2.2? 渦旋時間的考察? 固定GMO∶ET∶水＝64∶2∶34，60 ℃水浴，1.0%梔子苷加入量的條件下，考察1、2、3、4 min 渦旋時間對凝膠制備的影響。結果顯示，渦旋3、4 min梔苷水溶液可均勻分散在油相中，且形成的立方液晶凝膠無色澄清透明，故選擇3 min作為渦旋時間。

2.2.2.3? 梔子苷加入量的考察? 固定GMO∶ET∶水＝64∶2∶34，60 ℃水浴，渦旋3 min的條件下，比較0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、3.0%不同梔子苷的加入量。以凝膠的外觀性狀和PLM的表征為指標進行考察。結果，梔子苷加入量為0.5%和1.0%的凝膠外觀澄清透明，在PLM下為立方液晶，而加入量為1.5%、2.0%、3.0%的凝膠，外觀呈霧化狀，黏度降低，具有流動性，PLM下為層狀液晶，故確定梔子苷的加入量為1.0%。

2.2.2.4? GMO∶ET∶水最佳比例的確定? 在已篩選的空白立方液晶凝膠區域及附近區域擬定9個處方，分別為GMO∶ET∶水為45∶5∶50、54∶6∶40、63∶7∶30、63∶3∶34、63∶2∶35、64∶4∶32、64∶3∶33、64∶2∶34、64∶1∶35。固定60 ℃水浴，1.0%的梔子苷加入量，渦旋3 min，以PLM、SAXS對制備的產品進行表征，結果顯示，處方比例為45∶5∶50、54∶6∶40、63∶7∶30、63∶3∶34、64∶3∶33、64∶2∶34、64∶1∶35的產品均為立方液晶凝膠，其他比例得到的產品為層狀液晶。以凝膠的外觀（是否均勻、澄清透明、有無氣泡）及其梔子苷的含量為評價指標，進一步比較制得的立方液晶凝膠產品，結果表明，GMO∶ET∶水的比例以64∶3∶33為佳，制得的GE-CLC-G產品澄清透明、無氣泡，梔子苷含量最高。

2.2.2.5? 促滲劑種類及用量的優選? 采用改良的Franz擴散池進行體外透皮實驗，以累積滲透量（Qn）、累積滲透率（Q%）、滲透速率（Js）和增滲倍數（ER）為指標，對比促滲劑氮酮和丙二醇及其用量。

（1）大鼠離體皮膚預處理：取體質量為（180±20） g的雄性SD大鼠，乙醚麻醉后進行脫毛處理，再用生理鹽水沖洗，并除去皮下脂肪和組織，剪下腹部皮膚。將得到的腹部皮膚置于冰箱冷凍，保存備用。

（2）體外透皮實驗：使用改良的Franz擴散池進行實驗，將大鼠離體皮膚固定于Franz擴散池中，池內（32±1） ℃恒溫水浴，角質層朝向供給池，接收池中加入新鮮且已脫氣的生理鹽水，供給池內分別加入0.2 g含有不同種類與用量促滲劑[1%氮酮、2%氮酮、1%氮酮∶丙二醇（1∶1）、2%氮酮∶丙二醇（1∶1）]的樣品，每組平行做3份。分別于0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0、24.0 h取出全部接收液[10]，同時補充等體積同溫的接收液，并用0.45 μm微孔濾膜過濾，HPLC法測定梔子苷含量，以累積滲透量（Qn）為縱坐標，滲透時間（t）為橫坐標，繪制累積滲透曲線，并按下式計算Qn、累積滲透率（Q%）、增滲倍數（ER）。

式中Qn為t時間內單位面積經皮累積透皮量（μg·cm-2）；Ci表示第i個時間點的樣品濃度（μg/mL），Vi為每次采樣體積（mL）。i、n分別為取樣次數。A為有效透皮面積（cm2）；M為樣品中的梔子苷含量；ER為增滲倍數。取累積滲透曲線中的直線部分進行線性回歸，所得斜率即為滲透速率Js（μg·cm-2·h-1），J0為不加促滲劑時藥物固有的滲透速率。結果見表2、圖4。

（3）離體皮膚滯留量實驗：透皮實驗結束后取下擴散池中的皮膚，剪取有效透皮面積部分，用生理鹽水沖洗后剪碎成小塊，加入1 mL生理鹽水勻漿，再加入等體積的甲醇超聲30 min，離心15 min（離心半徑6 cm，12 000 r/min）、取上清液，0.45 μm微孔濾膜過濾，HPLC法測定梔子苷含量，計算皮膚滯留量。詳見表2。

體外透皮實驗表明，除2%氮酮外，其他促滲劑組的透皮性能均明顯優于不加促滲劑組，其中以1%氮酮∶丙二醇（1∶1）為最佳，其累積滲透量、累積滲透率、滲透速率和增滲倍數均明顯優于1%氮酮、2%氮酮和不加促滲劑組；略優于2%氮酮∶丙二醇（1∶1）組，兩者無顯著性差異。皮膚滯留量實驗表明，1% 氮酮∶丙二醇（1∶1）最佳，其次為1%氮酮組。綜合考慮選用1%氮酮∶丙二醇（1∶1）作為GE-CLC-G的促滲劑。

2.2.3? 驗證試驗? 按照優選后的工藝及處方，GMO∶ET∶水＝64∶3∶33，水浴溫度為60 ℃，精密稱取處方量GMO，水浴熔融完全，靜置冷卻至室溫待用。以氮酮∶丙二醇=1∶1為促滲劑，加處方量的ET和1%促滲劑至上述待用溶液中混勻，作為油相。另稱取1%梔子苷，加入處方量的純化水，水浴加熱作為水相。將兩相分別水浴加熱到60 ℃后，趁熱將油相緩慢加入水相并渦旋3 min，完成后密封，置于25 ℃恒溫箱中避光保存，3 d后即得GE-CLC-G。平行操作3份，制得的產品均澄清透明，PLM和SAXS表征均為立方液晶凝膠，測得的梔子苷含量為（9.94±0.02） mg/g。表明該優化工藝穩定、可行。

2.3? 不加促滲劑的GE-CLC-G的制備

采用“2.2.3”項下的方法，除“1%促滲劑”外其余操作相同，制得不加促滲劑的GE-CLC-G。

2.4? 梔子苷軟膏的制備

采用課題組前期已建立的梔子苷軟膏處方及工藝條件[11]，制備得不加促滲劑的梔子苷軟膏（簡稱“梔子苷軟膏”）。

2.5? GE-CLC-G的性狀、pH值

3批制得的GE-CLC-G為無色、澄清透明的凝膠狀半固體，pH值為6.70±0.02。

2.6? GE-CLC-G的表征

2.6.1? PLM檢測? 取適量GE-CLC-G，均勻涂布于載玻片上，蓋上蓋玻片并壓緊，置于PLM下觀察其光學性質，結果發現梔子苷立方液晶為暗視野，無雙折射現象，與立方液晶光學各向同性相符合，見圖5。由此，初步推斷其為立方液晶。

2.6.2? SAXS檢測? 取適量GE-CLC-G放入樣品池中，置于SAXS檢測室，抽真空至1×10-5 Pa，在25 ℃下平衡10 min后測定（X射線光源為CuKα輻射，λ=0.154 18 nm，管壓40 kV，管流50 mA），測試時間為10 min，以鋁箔為載體，用影像板記錄散射信息，鋁的散射對樣品的影響已扣除。將散射強度（l）對散射矢量（q）作圖即得SAXS圖譜，見圖6。采用SGI軟件處理圖譜，根據散射矢量的比值確定內部晶格。結果顯示空白液晶凝膠與梔子苷液晶凝膠均有5個散射峰，其散射矢量比值均為α1∶α2∶α3∶α4∶α5=■∶■∶■∶■∶■，結果表明空白液晶凝膠與梔子苷液晶凝膠均為立方相，其晶型均為雙菱形（pn3m），晶格參數均為11.246 nm，加入梔子苷不造成梔子苷液晶凝膠晶型的改變。

2.7? GE-CLC-G的體外透皮研究

稱取GE-CLC-G、不加促滲劑的GE-CLC-G和梔子苷軟膏各0.2 g，按“2.2.2.5”項下方法進行透皮實驗和離體皮膚滯留量實驗，每組平行做3份，對比3種梔子苷經皮制劑的體外透皮性能。結果表明，三者的滲透速率（Js）分別為29.94、11.36和6.07 μg·cm-2·h-1；GE-CLC-G 24 h的累積滲透量（Qn）約為不加促滲劑的GE-CLC-G的2.8倍、梔子苷軟膏的4.9倍。體外透皮性能：GE-CLC-G>不加促滲劑的GE-CLC-G>梔子苷軟膏；且GE-CLC-G的皮膚滯留量明顯高于另兩種制劑，見表3。

2.8? GE-CLC-G流變學性質考察

2.8.1? 線性黏彈區測試? 分別取GE-CLC-G和梔子苷軟膏適量，用DHR-2流變儀進行振幅掃描，測試溫度設置為（25.0±0.1） ℃、（32.0±0.1） ℃（皮膚溫度）。采用Oscillation-Amplitude測試模式，控制應變范圍為0.01%～20.00%，掃描結果見圖7，直線部分為線性黏彈區，在此區域復合模量G*不隨應力、應變而變化?？傻肎E-CLC-G在（25.0±0.1） ℃、（32.0±0.1） ℃兩種溫度下的應力范圍為11.1～195.6 Pa、6.5～62.6 Pa；梔子苷軟膏的應力范圍分別為0.2～13.1 Pa、0.2～9.3 Pa。兩種測試溫度下，應力范圍內GE-CLC-G的復合模量G*均大于梔子苷軟膏。上述結果表明，GE-CLC-G的微觀網絡結構更強，抗外力作用更強。

2.8.2? 流變曲線測試? 分別取GE-CLC-G和梔子苷軟膏適量，采用DHR-2流變儀進行穩態剪切測試。設置Flow-sweep測量模式，測試溫度為（25.0±0.1） ℃、（32.0±0.1） ℃，剪切速率為0.01～100 s-1，采用錐板夾具（直徑40 mm，角1.017°），浸潤時間10 s。結果見圖8，GE-CLC-G的黏度（η）較梔子苷軟膏大，且黏度都隨剪切速率（γ）的增大而降低，此過程表現出剪切變稀性質，均為假塑性流體[12]。

2.8.3? 頻率掃描? ?分別取GE-CLC-G、梔子苷軟膏適量，采用DHR-2流變儀進行頻率掃描。在線性黏彈區的應力范圍內，選取10 Pa的應力值進行掃描。采用Oscillation-Frequence模式，測試溫度為（25.0±0.1） ℃、（32.0±0.1） ℃，結果見圖9，可看出立方液晶凝膠的復合黏度較軟膏更大；與圖9進行對比，發現GE-CLC-G在振蕩頻率內測得的復合黏度（η*）與穩態時的剪切黏度（η）兩值相似，符合Cox-Merz規則，可進一步說明其為立方相。

3 討論

立方液晶因其獨特的內在結構和理化性質在皮膚給藥中具有明顯優勢[13-14]。立方液晶既可包裹不同分子量的活性藥物，又可包裹不同極性的藥物；具有良好的經皮滲透性，包裹的藥物能進入深層皮下組織；立方液晶屬于熱力學穩定體系，具有良好的穩定性。立方液晶常以前體、微粒分散體和凝膠3種形式使用[15-16]。凝膠的制備工藝簡單，通常為水相與油相按比例混勻，且生物黏附性大，可緩慢釋放藥物。相比于普通軟膏，立方液晶凝膠的透皮性與抗外力能力均要更佳，本文的研究結果也證實了立方液晶凝膠的優勢。

立方液晶凝膠兩親性材料的選擇，目前研究相對較早且最多的基質材料是GMO[17]。其具有良好的生物相容性，口服或外用具有更低的刺激性和毒性，使GMO成為制備立方液晶的首選材料[18]。制備GE-CLC-G時，除處方組成之外，能否攪拌均勻也是影響其形成的關鍵因素。此外，制備過程中應注意保持水浴溫度的恒定，本實驗為控制好溫度將西林瓶在恒溫水浴中進行渦旋。

體外透皮試驗的接收液應具有接受透皮藥物的能力，并符合漏槽條件[19]。接收液一般使用生理鹽水來模擬皮膚的生理環境，若藥物水溶性較差，可以加入緩沖液、表面活性劑以增加其溶解度[20]。梔子苷為水溶性藥物，生理鹽水作為接受液已可符合條件，故本實驗接受液選擇生理鹽水。體外透皮研究結果表明，相比于不加促滲劑的GE-CLC-G與梔子苷軟膏的體外透皮性能，GE-CLC-G的累積滲透量與皮膚滯留量均為最高的一組。GE-CLC-G經皮治療關節炎既可透皮吸收至全身，又能起到局部滯留作用，這種局部滯留作用也可幫助藥物后續發揮長效治療作用。作為一種新型的藥物載體，立方液晶凝膠在經皮給藥制劑研發中具有良好的前景。但仍存在輔料種類較為局限、藥物遞送機制不明確、臨床應用較少等問題，尚有待進一步的深入研究。

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