暖心康通過“代謝-炎癥”網絡調控巨噬細胞極化對心肌梗死后小鼠心室重構的影響

林祉均，陳梓欣，江佳林，董鑫，關卓驥，王陵軍（廣州中醫藥大學第一附屬醫院/中醫證候全國重點實驗室，廣東廣州 510405）

急性心肌梗死后心室重構是指在發生急性心肌梗死后，非局限于梗死的心肌區域，而是整個心室發生的進行性擴張和外形改變，尤其是左心室發生包括心室容積、室壁厚度及心肌結構的改變。心肌梗死后心室重構涉及多種病理過程，其中線粒體能量代謝異常及免疫炎癥反應發揮了重要作用。研究[1]顯示，心肌能量代謝障礙可導致心臟結構和功能的異常，而心室重構則進一步加重線粒體能量代謝紊亂，二者相互影響。急性心肌梗死后心室重構的主要病理基礎為心肌纖維化，心肌纖維化是一種以成纖維細胞異常增殖、膠原過度沉積及異常分布為特征的病理表現。心肌梗死狀態下，免疫細胞被大量激活，生成和分泌多種活性生長因子，促進心肌成纖維細胞活化并大量增殖。其中，巨噬細胞作為重要的免疫細胞，參與心肌梗死后“損傷-修復”及心室重構全過程。

根據臨床表現，心肌梗死后心室重構可歸于中醫學“胸痹”“心水”范疇，并且與“心咳”“水腫”“支飲”“心悸”“喘”“哮”等病證密切相關。目前一般認為其病機多屬本虛標實，本虛主要為氣、血、陰、陽虧虛，標實為血瘀、水停等病理產物[2]。暖心康是本院冼紹祥教授團隊治療慢性心力衰竭的經驗方，由紅參與毛冬青2 味中藥組成，具有益氣溫陽，解毒活血利水之功效。前期研究[3-5]表明，暖心康方能夠改善慢性心力衰竭患者的心功能及中醫證候，其機制可能與改善心室重構、減輕炎癥反應、改善線粒體功能、減少心肌細胞凋亡等有關。故本研究擬基于“代謝-炎癥”網絡調控巨噬細胞極化，探討暖心康改善心肌梗死致心力衰竭小鼠心肌纖維化及延緩心室重構進程的作用與機制，以期為中藥復方防治心力衰竭提供新的理論依據和治療靶點。

1 材料與方法

1.1 細胞及動物 （1）RAW 264.7 巨噬細胞（貨號：ZQ0098），購自上海中喬新舟生物科技有限公司。（2）30 只SPF 級C57BL/6J 雄性小鼠，6～8 周齡，體質量21～28 g，購自廣東省醫學實驗動物中心，實驗動物生產許可證號：SCXK（粵）2018-0002；飼養于廣州中醫藥大學嶺南醫學研究中心SPF級實驗動物中心。（3）12 只SPF 級SD 大鼠，雌雄各半，體質量約200 g，購自廣州中醫藥大學實驗動物中心，實驗動物生產許可證號：SCXK（粵）2018-0034；飼養于廣州中醫藥大學實驗動物中心，實驗動物使用許可證號：SYXK（粵）2018-0001。動物實驗均通過廣州中醫藥大學實驗動物倫理委員會批準，倫理批文號：120191127004。

1.2 藥物及主要試劑 暖心康干膏粉委托廣州中醫藥大學科技園制備。制備方法：紅參、毛冬青（23∶77）粗粉加70%乙醇，回流提取后過濾，合并濾液減壓回收乙醇，加入二甲基硅油繼續濃縮，浸膏減壓干燥后粉碎，取粉末。

PRIM1640 培養基（批號：C11875500BT）、胎牛血清（FBS，批號：10100147），均購自美國Gibco 公司；Masson 染色試劑盒，武漢賽維爾生物科技有限公司，批號：G1006；MitoSox Red線粒體超氧化物熒光探針，美國賽默飛世爾科技公司，批號：M36008；糖酵解壓力測試試劑盒，美國安捷倫（Aglient）公司，批號：103020-100；脂多糖（LPS），北京索萊寶科技有限公司，批號：L8880；F4/80抗體（批號：565410）、CD11b抗體（批號：557672），美國BD 公司；CD86抗體，美國Biolegend 公司，批號：159202；RNAzol RNA 抽提試劑，美國MRC 公司，批號：RN190；Fastking RT 反轉錄試劑盒，北京天根生化科技公司，批號：KR116。

1.3 主要儀器 Vevo?2100 高分辨率小動物超聲成像系統，加拿大VisualSonics 公司；Harvard Inspira ASVv容量控制動物呼吸機，美國自然基因有限公司；FACS LSRFortessa 流式細胞儀，美國BD 公司；Seahorse XF24 細胞能量代謝分析儀，美國安捷倫公司；CFX96 Touch 實時熒光定量PCR 檢測儀，美國Bio-Rad公司。

1.4 模型復制 所有小鼠適應性喂養1 周后，分別稱體質量，以0.5%戊巴比妥鈉（50 mg·kg-1）進行腹腔注射麻醉；經小鼠口腔氣管插管，固定后連接呼吸機，設定呼吸頻率為100 次·min-1，潮氣量為2.5 mL。沿胸骨左側第3、4 肋間剪開小鼠胸腔，暴露心臟；剖開心包膜，找到左心耳，在其下方1～2 mm 處用8-0號雙針縫合線穿過左前降支冠狀動脈下方，并穿過心肌組織結扎牢固，可見心尖處明顯發白；隨后關胸并逐層縫合胸部肌肉、皮膚。假手術組僅進行相同的開胸手術操作，但不進行心肌梗死結扎手術。

1.5 分組及給藥 將30只C57BL/6J雄性小鼠隨機分為3組：假手術組、模型組、暖心康組，每組10只。暖心康組按照前期研究[3-5]設定劑量給予暖心康干膏粉（1.65 g·kg-1）混懸液灌胃，灌胃體積為10 mL·kg-1，每日1 次，連續4 周，假手術組、模型組給予同體積生理鹽水灌胃。

1.6 暖心康含藥血清制備 將12 只SD 大鼠隨機分為含藥血清組和空白血清組，每組6只，雌雄各半。將暖心康干膏粉用無菌生理鹽水稀釋，充分震蕩溶解，灌胃前適當加熱。含藥血清組按照1.15 g·kg-1劑量[6]給予暖心康干膏粉混懸液灌胃（每次1 mL），每日2 次，持續灌胃5 d；空白血清組給予等量生理鹽水灌胃。末次灌胃后2 h 內，采用3%戊巴比妥鈉麻醉大鼠，在無菌條件下腹主動脈采血；靜置2 h 后，以4 ℃、3 000 r·min-1（離心半徑=8.5 cm）離心20 min；取上清液，56 ℃水浴滅活1 h，過濾除菌后凍存待用。

1.7 細胞培養及干預 采用含10%胎牛血清及1%雙抗的1640 培養基培養RAW 264.7 巨噬細胞。采用200 μg·mL-1脂多糖誘導巨噬細胞M1極化模型。分組如下：空白血清對照組（含5%空白血清+5%胎牛血清的培養基）、暖心康含藥血清組（含5%暖心康含藥血清+5%胎牛血清的培養基）、脂多糖組（含5%空白血清+5%胎牛血清的培養基+200 μg·mL-1脂多糖）、暖心康含藥血清+脂多糖組（含5%暖心康含藥血清+5%胎牛血清的培養基+200 μg·mL-1脂多糖），各組細胞置于細胞培養箱中孵育16 h后進行后續實驗。

1.8 Masson 染色法檢測心肌組織膠原沉積情況 小鼠心臟取材后，經固定、脫水、石蠟包埋、切片后，使用Masson 染色試劑盒染色：用Weigert 氏鐵蘇木素染5 min，清洗后使用1%鹽酸乙醇分化數秒，沖洗數分鐘返藍；麗春紅酸性品紅液染5～10 min，蒸餾水快速漂洗；使用磷鉬酸水溶液處理約3～5 min 后，用苯胺藍液復染5 min；1%冰醋酸處理1 min 后，脫水、晾干，封片。將切片置于光學顯微鏡下觀察并采集圖像。

1.9 超聲檢測小鼠心功能 用2.5%異氟烷氣體吸入麻醉小鼠，胸部脫毛后將小鼠固定于小動物恒溫操作臺上，以1.0%異氟烷氣體維持麻醉；使用超聲探頭檢測小鼠心功能，采集指標包括：左室射血分數（LVEF）、收縮末期左室前壁厚度（LVAWS）及舒張末期左室前壁厚度（LVAWD）。

1.10 流式細胞術檢測小鼠心臟巨噬細胞分布情況研磨小鼠心臟組織，提取巨噬細胞，將組織勻漿過濾后置于50 mL 離心管中，以1 700×g離心5 min；棄上清，加入1 mL HANKS 液重懸；然后置于15 mL離心管中，加入4 mL紅細胞裂解液，以2 000×g離心5 min；棄上清，加入200 μL HANKS 液重懸。每管細胞加入連接有熒光素的F4/80、CD11b、CD86 抗體各1 μL 進行免疫標記反應，充分混勻，插冰上；每10 min 吹打30～40 次，重復3 次后，加HANKS 液至10 mL；以2 000×g離心5 min；棄上清，加入1 mL HANKS 液重懸；加入流式管，采用流式細胞分析儀檢測。

1.11 qPCR 法檢測心臟組織 LDHA、 CPT-1、GLUT4、IDH、SDHa mRNA 表達 采用RNAzol RNA 抽提試劑提取小鼠心臟組織總RNA，檢測RNA含量和純度（A260/A280=1.8～2.0）。采用Fastking RT 反轉錄試劑盒進行2步法逆轉錄反應，配制反轉錄體系1，反應條件為：42 ℃、3 min，以去除樣本中gDNA；接著配制反轉錄體系2，反應條件為：42 ℃、15 min，95 ℃、3 min，4 ℃保持。然后進行PCR 反應，反應體系為20 μL；反應條件：預變性95 ℃、30 s，變性95 ℃、5 s，退火60 ℃、30 s，共40個循環。擴增反應后進行熔解曲線分析，判斷產物是否有非特異性擴增；分析擴增曲線，計算Ct值；以GAPDH 作為內參基因，采用2-△△Ct法計算各組間mRNA 表達水平差異，模型組基因表達量設為1，實驗重復3次及以上。引物由生工生物工程（上海）公司合成，引物序列見表1。

“情然而心為之擇謂之慮。心慮而能為之動謂之偽。慮積焉，能習焉而后成謂之偽?！庇疂M足的必然通過心活動，經由思慮而非單純的欲的活動即為“偽”?！皞巍苯浻蓪嵺`而積累的“正利”“正義”的經驗就成為了荀子所稱道的“禮”。因“好利而惡害”為桀、紂所同然之性，故心的思慮活動就成為禮之制作的關鍵，而圣人(君子)之心的思慮又在其中處于中心地位。

表1 PCR 引物序列Table 1 Primer sequences for PCR

1.12 qPCR 法檢測RAW 264.7 細胞MPC1 mRNA表達 細胞分組及干預同“1.7”項下。細胞經處理后，吸去原培養基，使用PBS 緩沖液清洗細胞2 次；吸去PBS 緩沖液，加入RNAzol RNA 細胞抽提試劑，反復吹打細胞；將吹打下的貼壁細胞收集至無酶無菌的1.5 mL EP 管中，置于冰上。后續操作按照試劑說明書進行。提取細胞總RNA 后，采用Fastking RT反轉錄試劑盒進行逆轉錄，接著按照“1.11”項下方法檢測MPC1 mRNA 表達水平。引物合成由生工生物工程（上海）公司合成，引物序列見表1。

1.13 糖酵解壓力測試實驗檢測RAW 264.7 細胞的糖酵解水平 將RAW 264.7 細胞接種在24 孔微孔板中，細胞密度為每孔2×106個，細胞分組及干預同“1.7”項下。各組RAW 264.7細胞干預16 h后，按照安捷倫Seahorse XF 糖酵解壓力測試試劑盒說明書步驟操作。將包括葡萄糖（10 mmol·L-1）、寡霉素A（1.0 mmol·L-1）和2-脫氧葡萄糖（50 mmol·L-1）在內的化合物按順序注射到微孔板中，使用Seahorse XFe24分析儀檢測細胞糖酵解活性。

1.14 MitoSox Red 熒光染色法檢測RAW 264.7 細胞線粒體氧化應激損傷程度 細胞分組及干預同“1.7”項下。按照MitoSox Red 熒光染色試劑盒說明書步驟配制儲存液，取適量儲存液按照1∶1 000 的比例加入HBSS（含鈣鎂離子）中配制成工作液。各組RAW 264.7 細胞干預16 h 后，吸棄原培養基，HBSS 洗滌1～2 次；加入適量預孵育后的MitoSox Red 工作液，在37 ℃下與細胞共同避光孵育10 min；然后吸棄工作液，HBSS 洗滌1～2 遍；再用0.25% 胰酶消化細胞，集中至15 mL離心管配平，以1 000 r·min-1（離心半徑=8.5 cm）離心5 min；吸棄上清液，用500 μL HBSS重懸細胞后，加入流式管中，采用流式細胞分析儀檢測。

1.15 統計學處理方法 采用SPSS 25.0 統計軟件進行數據分析；計量資料以均數±標準差（±s）表示；多組間比較采用單因素方差分析（One-way ANOVA），兩兩比較采用LSD 檢驗，方差不齊采用Dunnett’s T3檢驗；不符合正態分布則采用秩和檢驗；以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 暖心康對心肌梗死小鼠心肌纖維化的影響 結果見圖1。假手術組小鼠心臟組織中心肌纖維排列整齊、致密，無異常的膠原沉積，且心室壁厚度及心室腔大小適中。與假手術組比較，模型組小鼠的心臟膠原纖維藍染面積明顯增加，并伴有室壁變薄，左心室腔增大。與模型組比較，暖心康組小鼠的心臟膠原纖維沉積明顯減少，且室壁厚度增加。結果表明，心肌梗死小鼠的心肌纖維化程度嚴重，影響心臟結構和正常功能，而暖心康能改善心力衰竭小鼠心肌纖維化，減輕心室重構。

圖1 暖心康對心肌梗死小鼠心肌纖維化的影響（Masson染色）Figure 1 Effect of Nuanxinkang on myocardial fibrosis in mice with myocardial infarction（Masson staining）

2.2 暖心康對心肌梗死小鼠心功能的影響 結果見圖2。與假手術組比較，模型組小鼠的LVEF、LVAWS、LVAWD 等心功能指標水平均顯著降低（P＜0.01，P＜0.001）。與模型組比較，暖心康組小鼠的LVEF、LVAWS、LVAWD 等心功能指標水平均顯著升高（P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001）。結果表明，心肌梗死小鼠出現明顯的心功能降低、心室壁受損，而暖心康能改善心肌梗死小鼠的心功能，修復受損心室壁。

圖2 暖心康對心肌梗死小鼠心功能的影響（±s，n=4）Figure 2 Effect of Nuanxinkang on cardiac function in mice with myocardial infarction（±s，n=4）

2.3 暖心康對心肌梗死小鼠心臟組織中LDHA、GLUT4、CPT-1 mRNA 表達水平的影響 結果見圖3。與假手術組比較，模型組小鼠心臟組織中LDHA、CPT-1 mRNA 表達明顯上調（P＜0.05），GLUT4 mRNA 表達顯著下調（P＜0.01）。與模型組比較，暖心康組小鼠心臟組織中LDHA、CPT-1 mRNA表達顯著下調（P＜0.01，P＜0.001），GLUT4 mRNA表達顯著上調（P＜0.01）。結果表明，暖心康可能通過抑制心肌梗死后小鼠心臟脂肪酸氧化和糖酵解，促進心肌細胞對葡萄糖的攝取，從而改善心肌梗死后心臟能量代謝底物的攝取和利用。

圖3 暖心康對心肌梗死小鼠心臟組織中LDHA、CPT-1、GLUT4 mRNA 表達的影響（±s，n=4）Figure 3 Effects of Nuanxinkang on mRNA expressions of LDHA，CPT-1 and GLUT4 in cardiac tissues of mice with myocardial infarction（±s，n=4）

2.4 暖心康對心肌梗死小鼠心臟組織中SDHa、IDH mRNA 表達的影響 結果見圖4。與假手術組比較，模型組小鼠心臟組織中IDH、SDHa mRNA 表達明顯下調（P＜0.05）。與模型組小鼠比較，暖心康組小鼠心臟組織SDHa、IDH mRNA 表達顯著上調（P＜0.01）。結果表明，暖心康可能通過上調SDHa 及IDH mRNA表達，減輕檸檬酸和琥珀酸的堆積，從而促進心肌梗死后心臟組織線粒體三羧酸（TCA）循環的再通。

圖4 暖心康對心肌梗死小鼠心臟組織中SDHa、IDH mRNA表達的影響（±s，n=3～6）Figure 4 Effects of Nuanxinkang on mRNA expressions of SDHa and IDH in cardiac tissues of mice with myocardial infarction（±s，n=3-6）

2.5 暖心康對心肌梗死小鼠心臟組織促炎型巨噬細胞表達的影響 結果見圖5。與假手術組比較，模型組小鼠心臟組織中CD86染色陽性細胞數量顯著增加（P＜0.001）。與模型組比較，暖心康組小鼠心臟組織中CD86陽性細胞數量顯著減少（P＜0.001）。結果表明，心肌梗死狀態下促炎型巨噬細胞被大量激活，而暖心康能夠抑制心肌梗死后小鼠心臟組織促炎型巨噬細胞的極化趨勢，減輕炎癥反應。

圖5 暖心康對心肌梗死小鼠心臟組織中CD86 染色陽性細胞比例的影響（±s，n=3）Figure 5 Effect of Nuanxinkang on the proportion of CD86 positive cells in cardiac tissues of mice with myocardial infarction（± s，n=3）

2.6 暖心康對促炎型巨噬細胞糖酵解水平及MPC1 mRNA 表達的影響 結果見圖6、圖7。與空白血清對照組比較，暖心康含藥血清組巨噬細胞的糖酵解水平無明顯變化（P＞0.05），而脂多糖組巨噬細胞的糖酵解水平顯著升高（P＜0.01），MPC1 mRNA 表達顯著下調（P＜0.001）。與脂多糖組比較，暖心康含藥血清+脂多糖組的巨噬細胞糖酵解水平明顯降低（P＜0.05），MPC1 mRNA 表達顯著上調（P＜0.001）。上述結果表明，脂多糖能夠誘導RAW 264.7 巨噬細胞極化，糖酵解水平升高，同時抑制線粒體MPC1 mRNA表達，而暖心康能夠下調巨噬細胞糖酵解水平，上調MPC1 mRNA表達。

圖6 暖心康含藥血清對促炎型巨噬細胞糖酵解水平的影響（±s，n=3～4）Figure 6 Effect of Nuanxinkang-containing serum on glycolysis level of pro-inflammatory macrophages（±s，n=3-4）

圖7 暖心康含藥血清對促炎型巨噬細胞MPC1 mRNA 表達的影響（±s，n=5）Figure 7 Effect of Nuanxinkang-containing serum on mRNA expression of MPC1 in pro-inflammatory macrophages（±s，n=5）

2.7 暖心康對脂多糖誘導的RAW 264.7 巨噬細胞線粒體活性氧（ROS）水平的影響 結果見圖8。與空白血清對照組比較，暖心康含藥血清對照組巨噬細胞的ROS 水平無明顯變化（P＞0.05），而脂多糖組巨噬細胞的ROS 水平顯著升高（P＜0.01）。與脂多糖組比較，暖心康含藥血清+脂多糖組巨噬細胞的ROS 水平顯著降低（P＜0.01）。結果表明，脂多糖能夠誘導RAW 264.7 巨噬細胞向促炎型分化，ROS 水平升高，增加氧化損傷，而暖心康能夠降低脂多糖刺激誘導的促炎型巨噬細胞的ROS產生，改善細胞氧化損傷。

圖8 暖心康含藥血清對脂多糖誘導的RAW 264.7 巨噬細胞活性氧水平的影響（±s，n=4）Figure 8 Effect of Nuanxinkang-containing serum on ROS levels of RAW 264.7 macrophages induced by LPS（±s，n=4）

3 討論

急性心肌梗死后心室重構通常指患者發生急性心肌梗死后，其心室持續發生的形態、結構與功能的改變過程。心肌梗死造成的損傷刺激能夠激活包括巨噬細胞在內的先天免疫系統和一系列的炎癥途徑[7]。巨噬細胞是心肌梗死后重要的炎癥調控細胞，能夠響應不同的微環境被激活為具有促炎或抗炎作用的亞型，其介導的免疫炎癥反應參與心肌梗死后心臟組織的“損傷-修復”全過程，與心室重構密切相關[8]。心肌能量供應不足和代謝紊亂是心室重構甚至心力衰竭重要的病理表現之一，近年來研究[9]發現，能量代謝模式與免疫炎癥反應密切相關，因此推測心肌梗死后細胞能量代謝異?？赡苡绊懢奘杉毎拿庖哐装Y反應，進而影響心肌纖維化和心室重構。

為進一步證明暖心康可能基于“代謝-炎癥”網絡改善心肌梗死后心室重構的作用機制，本研究建立了心肌梗死小鼠模型，通過流式細胞術分析了心臟組織中CD86陽性細胞數。CD86為促炎型巨噬細胞極化的重要標志，能夠衡量各組小鼠心臟組織促炎型巨噬細胞極化程度。結果發現，暖心康能夠明顯降低CD86 的表達，抑制促炎型巨噬細胞極化。進一步通過對比不同組小鼠心臟組織中LDHA、CPT-1、GLUT4 mRNA 表達水平，發現暖心康能夠降低心肌梗死小鼠心臟LDHA、CPT-1 mRNA 表達，同時上調GLUT4 mRNA 表達，說明暖心康可能通過抑制心肌梗死后小鼠心臟脂肪酸氧化和糖酵解，促進心肌細胞對葡萄糖的攝取，改善心肌梗死后心臟能量代謝底物的攝取和利用。通過對比各組小鼠心臟組織中TCA循環關鍵代謝酶的mRNA表達水平，發現暖心康能夠上調心肌梗死小鼠心臟組織中IDH、SDHa mRNA 表達，從而減輕檸檬酸和琥珀酸堆積，促進TCA循環的再通。

本研究通過脂多糖刺激誘導RAW 264.7細胞構建促炎型巨噬細胞極化模型，對比含藥血清處理后促炎型巨噬細胞糖酵解水平的變化，結果顯示暖心康能夠抑制巨噬細胞能量代謝模式向糖酵解轉換；通過對比MPC1 mRNA 表達水平變化，結果表明暖心康可部分恢復促炎型巨噬細胞下調的MPC1 mRNA 表達。線粒體ROS 水平升高是細胞氧化應激損傷的重要標志。MitoSox 是一種完全自由通過細胞膜并能選擇性在活體細胞線粒體內長期滯留而不外漏的染色劑，被ROS 氧化后產生紅色熒光（FL-2 通道）。ROS釋放越多，紅色熒光染色陽性的細胞占比就越高，以此判斷細胞氧化損傷情況。通過對比不同組別巨噬細胞在脂多糖刺激下的氧化損傷水平，發現暖心康可以減輕巨噬細胞的氧化應激損傷，這一作用可能是通過對TCA 循環關鍵代謝酶的激活作用，緩解細胞線粒體內檸檬酸和琥珀酸堆積對TCA 循環的阻斷效應，以及抑制下游相關促炎信號通路激活來實現的。

LDHA 是糖酵解過程中的關鍵酶之一，其表達水平與糖酵解通量呈正相關[10]。LDHA 表達水平降低表明暖心康對于心肌梗死應激狀態下糖酵解途徑過度激活具有抑制作用。心臟需要比其他任何器官消耗更多能量，其可以利用各種代謝底物作為能量來源。心肌細胞在正常狀態下能靈活切換能量代謝底物，而在心力衰竭的缺血缺氧過程中，脂肪酸氧化應激性增加，同時葡萄糖也成為重要的代謝底物。葡萄糖穿過細胞膜，必須通過葡萄糖轉運蛋白（GLUT）的介導，GLUT4 是心臟組織中主要的葡萄糖轉運蛋白，約占總葡萄糖轉運蛋白的70%[11]。結果顯示，暖心康能夠減輕心肌梗死后CPT-1 大量激活，抑制過度脂肪酸氧化，同時上調GLUT4 表達，改善葡萄糖的轉運，從而優化受損心臟組織的能量底物轉化。研究[12]發現，分布于線粒體內膜的線粒體丙酮酸載體（MPC）復合物能夠調節線粒體丙酮酸通量，從而影響葡萄糖有氧氧化，抑制MPC1、MPC2 表達可促進糖酵解活性和乳酸生成。本研究結果表明，暖心康可能通過調整TCA 循環關鍵代謝酶表達，促進中斷的TCA循環再通，進一步修復心肌梗死后心臟線粒體的能量代謝。心肌梗死引發的炎癥激活狀態，促使心臟以巨噬細胞為主的免疫細胞代謝模式向產能效率更高的糖酵解轉變，而代謝模式的轉換造成TCA 循環出現斷裂，檸檬酸和琥珀酸等具有促炎效應的代謝物堆積，進而激活下游炎癥信號通路，進一步促進巨噬細胞向促炎趨勢轉化。本研究發現，在促炎型巨噬細胞極化的條件下，細胞內MPC1 表達水平亦受到抑制，而暖心康能夠顯著上調MPC1 表達，從而促進線粒體能量代謝向葡萄糖氧化轉變，同時降低糖酵解水平。

綜上所述，暖心康可能通過優化心肌梗死后心臟整體水平的能量代謝，抑制心肌梗死發生后代謝模式以糖酵解為主的促炎型巨噬細胞大量激活，通過代謝重編程調控巨噬細胞表型分化，從而發揮抗心肌纖維化、減輕炎癥反應及抗心室重構等作用。