基于特征圖譜及指標成分優化新清毒飲顆粒的制備工藝

陸小夢，古玉正，劉瑞媚，林銀慧，周珊宇，何欣欣，肖飛，張軍，黃新安（. 廣州中醫藥大學青蒿研究中心，廣東廣州 50405；. 廣州中醫藥大學科技產業園有限公司，廣東廣州 50445；. 廣州中醫藥大學中藥學院，廣東廣州 50006）

新清毒飲由國醫大師鄧鐵濤師承團隊治療病毒性感冒的臨床經驗方[1]加減而來，由蒲公英、金銀花、野菊花等17味中藥組成，具有清熱解毒、解表化濕、止咳平喘之功效，方中金銀花、蒲公英等多味藥材對流感病毒有良好的抑制活性，臨床上用于由流感病毒等引起的上呼吸道感染等疾病[2-5]。為了方便臨床使用，同時保證湯劑療效，將其開發成顆粒劑。依據《中藥新藥質量標準研究技術指導原則（試行）》[6]，中藥復方制劑應建立其特征圖譜并制定相應標準，并以相似度、相對峰面積等為檢測指標控制其質量。中藥特征圖譜現已廣泛用于中藥提取工藝環節的質量控制、藥材和制劑的整體評價[7-8]，但未見將特征圖譜與指標成分保留率相結合考察復方制劑制備工藝的研究。蒲公英為處方中的君藥，其主要成分菊苣酸具有抗病毒、抗菌、抗炎、調節免疫等藥理作用[9-11]。2020 年版《中國藥典》增加了蒲公英中菊苣酸的含量測定。處方中甘草的主要成分甘草酸具有抗病毒、抗炎、抗過敏等作用[12-14]。中藥復方制備過程中有效成分保留率易受煎煮溫度、溶劑、料液比等的影響[15-17]；在中試或大生產中，不穩定藥效成分如金銀花、蒲公英中綠原酸、菊苣酸等酚酸類成分經過相對長時間的提取、濃縮、干燥，保留率或有降低[18-20]。本研究擬建立新清毒飲的特征圖譜與蒲公英中菊苣酸、甘草中甘草酸的含量測定方法，以追蹤各工藝步驟中有效成分的保留情況，優化其制備工藝，并開展中試生產驗證優選的工藝路線，關注并克服規模生產下不穩定藥效成分的降解，制備與原方湯劑物質基礎近似的顆粒劑，以期重現新清毒飲湯劑臨床療效。

1 儀器與材料

SECVRA225D-1CN 十萬分之一電子天平、BSA224S-CW 萬分之一電子天平（德國賽多利斯有限公司）；LC-20AT 高效液相色譜儀（日本島津公司）；ZORBAX-SB-Phenyl色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm，美國安捷倫公司）；Symmertry?C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm，美國Waters 公司）；KQ-250DE 超聲清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）；R205B 旋轉蒸發儀（上海申勝生物科技有限公司）；3000 L 多功能提取罐、1000 L 減壓濃縮機組（江蘇沙家浜化工設備有限公司）；PS1000-NC 高速離心機（遼陽中聯制藥機械有限公司）；ZKS-5型真空上料機（江陰市宏達分體設備有限公司）；FZ200沸騰制粒機（浙江迦南科技股份有限公司）；DXDK-80C 顆粒全自動包裝機（珠海市天楹精密機械有限公司）；甲醇、乙腈（色譜純，德國Merck 公司）；水為超純水，其他試劑均為分析純。

對照品菊苣酸（批號：111752-202105，純度98.3%）、綠原酸（批號：110753-202119，純度96.3%）、蘆?。ㄅ枺?00080-202012，純度92.2%）、甘草苷（批號：111610-201908，純度95%）、木犀草苷（批號：111720-202111，純度96.6%）、蒙花苷（批號：111528-201911，純度98.5%）、補骨脂素（批號：110739-201918，純度99.6%）、甘草酸銨（批號：110731-202021，純度96.2%），中國食品藥品檢定研究院。處方飲片來源信息見表1。

表1 新清毒飲藥材來源信息Table 1 Source informations of Xinqingduyin

2 方法與結果

2.1 特征圖譜測定方法的建立

2.1.1 色譜條件 色譜柱為ZORBAX SB-Phenyl（4.6 mm × 250 mm，5 μm）；流動相：乙腈（A）-0.1%磷酸（B），梯度洗脫（見表2）；檢測波長：240 nm；流速：0.9 mL·min-1；柱溫：30 ℃；進樣量：10 μL。

表2 特征圖譜測定的流動相洗脫梯度Table 2 Elution gradient of mobile phase used in HPLC characteristic spectra

2.1.2 混合對照品溶液的配制 取對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含菊苣酸、綠原酸、蘆丁、甘草苷、木犀草苷、蒙花苷、補骨脂素、甘草酸分別為73.436、394.400、7.328、0.912、1.602、0.966、6.135、8.070 μg的混合對照品溶液。

2.1.3 新清毒飲顆粒及陰性顆粒的制備 按處方比例稱取17 味藥材飲片，加8 倍量水煎煮3 次，每次1 h，煎煮3 次，過濾，合并濾液；取濾液80 ℃減壓濃縮成浸膏（含飲片生藥量2 g·g-1）；取浸膏70 ℃干燥并粉碎成浸膏粉，以適量乳糖作輔料，制粒，即可得新清毒飲顆粒。按處方比例分別稱取缺單味藥材的飲片，同法制備新清毒飲陰性顆粒。

2.1.4 新清毒飲單味藥材配方顆粒的制備 取單味藥材的飲片50 g，同“2.1.3”項制備成單味藥材配方顆粒。

2.1.5 供試品、陰性對照、單味藥材樣品溶液的配制取新清毒飲顆粒1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇溶液50 mL，密塞，稱定質量，超聲處理20 min，放至室溫。再稱定質量，用50%甲醇溶液補足減失的質量，搖勻，濾過，即得新清毒飲供試品。另取陰性顆粒、單味藥材配方顆粒各1.0 g，同法制備陰性對照液、單味藥材對照液。

2.1.6 特征圖譜專屬性試驗與指認 取“2.1.2”“2.1.5”項下各溶液，按“2.1.1”項下方法進樣檢測，考察實驗方法的適用性及專屬性。特征圖譜見圖1。樣品中各峰分離良好，峰形對稱。通過陰性對照液、單味藥材溶液與供試品溶液色譜比較，對色譜峰進行歸屬和定位，共標定16個峰。1號峰歸屬于白花蛇舌草，6、10 號峰歸屬于金銀花，8、16 號峰歸屬于甘草，12號峰歸屬蒲公英，14號峰歸屬野菊花、桑葉，15號峰歸屬五指毛桃，2、3、4、5、7、9、11、13號色譜峰分別歸屬于多個藥味共有峰。通過對照品對照，鑒別了5號峰為綠原酸，7號峰為蘆丁，8、16號峰為甘草苷和甘草酸，9號峰為木犀草苷，12號峰為菊苣酸，14號峰為蒙花苷，15號峰為補骨脂素。

圖1 新清毒飲顆粒高效液相色譜（HPLC）特征圖譜Figure 1 HPLC fingerprint of Xinqingduyin Granules

2.1.7 精密度試驗 精密吸取同一份供試品溶液，按“2.1.1”項下色譜條件連續進樣6 次，記錄色譜峰，以5 號峰（綠原酸）為參照峰（S），計算各峰相對保留時間和相對峰面積。結果顯示，1～16 號峰的相對保留時間和相對峰面積的RSD 分別為0.01%～1.01%和0.15%～1.22%，表明儀器的精密度良好。

2.1.8 穩定性試驗 取同一份供試品溶液，分別于0、3、6、12、18、24、36 h 進樣測定，結果表明1～16 號峰的相對保留時間和相對峰面積的RSD 分別為0.01%～1.11%和0.12%～1.54%，表明供試品溶液在36 h內穩定性良好。

2.1.9 重復性試驗 精密稱取新清毒飲顆粒6 份，按“2.1.5”項制備供試品溶液，進樣測定，以5號峰（綠原酸）為參照峰，結果顯示1～16號峰的相對保留時間和相對峰面積的RSD 分別為0.01%～0.18%和0.29%～3.21%，表明該方法重復性較好。

2.2 含量測定方法

2.2.1 色譜條件 （1）菊苣酸：色譜柱為Agilent ZORBAX SB-Phenyl（4.6 mm × 250 mm，5 μm）；流動相：乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B），梯度洗脫（見表3）；流速：0.9 mL·min-1；柱溫：30 ℃；進樣量：10 μL；檢測波長：327 nm；理論塔板數按菊苣酸峰計算應不低于5 000。

表3 菊苣酸含量測定的流動相洗脫梯度Table 3 Elution gradient of mobile phase in the content determination of chicory acid

（2）甘草酸：色譜柱為Symmetry?C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B），梯度洗脫（見表4）；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：31 ℃；進樣量：10 μL；檢測波長：252 nm；理論塔板數按甘草酸峰計算應不低于5 000。

表4 甘草酸含量測定的流動相洗脫梯度Table 4 Elution gradient of mobile phase in the content determination of glycyrrhizic acid

2.2.2 對照品溶液的制備 取菊苣酸對照品適量，精密稱定，加甲醇制成濃度為151.480 3 μg·mL-1的菊苣酸對照品溶液。同法制成濃度為471.441 2 μg·mL-1的甘草酸對照品溶液。

2.2.3 供試品及陰性對照溶液制備 新清毒飲顆粒供試品溶液、缺蒲公英陰性對照液和缺甘草陰性對照液制備方法同“2.1.3”項下。

2.2.4 專屬性試驗 精密吸取“2.2.2”“2.2.3”項下各個溶液，按“2.2.1”項下色譜條件進行測定。供試品溶液色譜圖中，在與對照品溶液色譜相應位置上有相同保留時間的色譜峰，菊苣酸峰、甘草酸峰分離度良好，陰性無干擾。見圖2。

圖2 新清毒飲顆粒的高效液相色譜圖Figure 2 HPLC chromatography of Xinqingduyin Granules

2.2.5 線性關系考察 取“2.2.2”項下菊苣酸對照品溶液，加甲醇稀釋配制75.740 2、30.296 1、15.148 0、12.118 4、6.059 2、3.029 6 μg·mL-1的系列對照品濃度。同法，取甘草酸對照品溶液配制成188.576 5、94.288 2、37.715 3、18.857 6、9.428 8、4.714 4 μg·mL-1，依法進樣測定，以濃度（X）為橫坐標，峰面積（Y）為縱坐標，繪制標準曲線。菊苣酸線性方程為：Y=52 686.18X-28 106.94，r=1.000 0，表明菊苣酸在3.029 6～151.480 3 μg·mL-1范圍內，線性關系良好。甘草酸線性方程為：Y=8 026.63X+509.10，r=0.999 8，表明甘草酸在4.714 4～471.441 2 μg·mL-1范圍內，線性關系良好。

2.2.6 精密度試驗 取同一份菊苣酸、甘草酸對照品溶液，按“2.2.1”項重復進樣6 次測定，結果菊苣酸、甘草酸的峰面積的RSD 分別為0.92%、0.23%，表明精密度良好。

2.2.7 穩定性試驗 取“2.2.3”項下同一份供試品溶液，分別于0、8、12、16、24 h 進樣，結果菊苣酸的峰面積均值為477 754，RSD 為0.51%，甘草酸峰面積均值為120 273，RSD 為0.22%。結果表明供試品溶液24 h內穩定性良好。

2.2.8 重復性試驗 取同一批新清毒飲顆粒6 份，按“2.2.3”項制備供試品溶液，依“2.2.1”項下方法測定。測得菊苣酸平均含量為0.246 1 mg·g-1，RSD 為0.92%，甘草酸平均含量為0.758 1 mg·g-1，RSD 為0.48%。結果表明本方法重復性良好。

2.2.9 加樣回收測定 取已知含量的新清毒飲顆粒0.5 g，各6份，精密稱定，分別加入與顆粒中菊苣酸含量、甘草酸含量相等的對照品溶液，按“2.2.3”項下方法制備供試品并進樣測定，計算得菊苣酸、甘草酸回收率分別為99.77%、97.74%，RSD 分別為1.09%、2.79%。結果說明本方法可靠，結果準確。

2.3 工藝考察

2.3.1 提取工藝考察 按照臨床湯劑應用經驗，本試驗采用水煎煮法。按照預實驗結果，采用L9（34）正交試驗設計，將加水量（A）、提取時間（B）、提取次數（C）作為影響因素，因素與水平見表5。按正交試驗設計，制備S1～S9 號試驗溶液，取試驗溶液依“2.1”“2.2”項下方法測定特征圖譜及指標成分含量，計算保留率。

表5 新清毒飲顆粒的正交試驗因素水平表Table 5 Design of factors and levels of orthogonal test for Xinqingduyin Granules

2.3.1.1 特征圖譜結果分析 結果見圖3。從S1～S9 號試驗溶液圖譜可見，1～16 號特征峰均可保留，表明加水量、提取時間、提取次數等因素改變對成分種類未造成影響；以1 號試驗藥液（S1）中5 號峰（綠原酸）為參照峰，計算相對峰面積。結果見表6。各峰的相對峰面積RSD 較大，即對成分含量有影響，故應以指標成分的保留率結果優化工藝參數。

圖3 新清毒飲顆粒的正交試驗特征圖譜的疊加圖Figure 3 Superimposed characteristic chromatogram of orthogonal test for Xinqingduyin Granules

表6 新清毒飲顆粒的正交試驗特征圖譜相對峰面積結果Table 6 Results of relative peak area of characteristic chromatograms in orthogonal experiment of Xinqingduyin Granules

2.3.1.2 以指標成分保留率為指標優化工藝參數 設置菊苣酸保留率（X）、甘草酸保留率（Y）的權重系數分別為0.6、0.4，綜合評分（M）=（0.6X/菊苣酸最大的保留率+0.4Y/甘草酸最大的保留率）×100，對上述3個因素進行考察，優選較佳的提取工藝。試驗結果見表7，方差分析見表8。

表7 新清毒飲顆粒的正交試驗及結果Table 7 Orthogonal test and results of Xinqingduyin Granules

表8 新清毒飲顆粒的正交試驗方差分析Table 8 Analysis of variance for orthogonal test of Xinqingduyin Granules

結果顯示，各因素對試驗結果的影響大小依次為：C＞A＞B，加水量（A）、提取時間（B）均無顯著性影響，提取次數（C）對試驗結果有顯著性影響。為節約成本，縮短生產周期，保證有效成分的保留率，結合方差分析結果，擬采取最佳提取工藝：A1B1C3，即加8倍量水，提取3次，每次1 h。

2.3.2 濃縮工藝考察

2.3.2.1 濃縮方式考察 以“2.3.1”項下確定的提取工藝制備新清毒飲提取液，作為濃縮工藝對照樣品。準確量取2 500 mL提取液各2份，分別考察常壓、減壓濃縮成含飲片量2 g·g-1浸膏。取濃縮液，同“2.1”項下方法進樣測定特征圖譜，以對照樣品的特征圖譜中5 號峰為S 峰，計算各峰相對峰面積；依次將樣品的色譜圖導入“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統（2012 年版）”軟件，以對照樣品色譜圖為參照，對樣品色譜峰進行多點校正和Mark 峰匹配，計算相似度。同時，按“2.2”項下方法測定甘草酸、菊苣酸含量，計算保留率。

從特征圖譜可見，兩種濃縮方式均能保留1～16 號特征峰（見圖4）；常壓、減壓濃縮特征圖譜的相似度結果分別為0.963、0.999，均大于0.9，說明兩種方式未對成分種類造成顯著性影響；相同生藥量下，6、7 號等特征峰的相對峰面積差異較大（見表9），表明不同濃縮方式對含量有一定影響，故以指標成分保留率為指標進一步優化工藝參數。

圖4 新清毒飲顆粒不同濃縮方式的特征圖譜疊加圖Figure 4 Superimposed characteristic chromatograms of Xinqingduyin Granules with different concentrative methods

表9 新清毒飲顆粒不同濃縮方式特征圖譜的相對峰面積Table 9 The relative peak area of characteristic peaks of Xinqingduyin Granules with different concentrative methods

與對照樣品對比，減壓濃縮對試驗結果的影響較?。ㄒ姳?0），且濃縮時間短，結合相似度結果，最終選擇減壓濃縮。

表10 新清毒飲顆粒不同濃縮方式指標成分保留率結果Table 10 Results of retention rates of index components in Xinqingduyin Granules with different concentrative methods

2.3.2.2 濃縮溫度考察 按“濃縮方式”操作，準確量取提取液2 500 mL，各2 份，考察不同濃縮溫度（60～90 ℃）對特征圖譜及指標成分保留率的影響。

從特征圖譜可見，不同濃縮溫度均能保留1～16 號特征峰（見圖5）；濃縮溫度60～90 ℃特征圖譜的相似度結果均為0.999，說明不同濃縮溫度對成分種類未造成顯著性影響；不同濃縮溫度的特征圖譜中，1、6、7 號峰的相對峰面積差異略大，余峰差異不大（見表11），表明溫度對樣品的成分含量仍有一定的影響，故應進一步考察濃縮溫度對指標成分保留率的影響。

圖5 新清毒飲顆粒的不同濃縮溫度的特征圖譜疊加圖Figure 5 Superimposed characteristic chromatograms of Xinqingduyin Granules under different concentrative temperatures

表11 新清毒飲顆粒不同濃縮溫度的特征圖譜相對峰面積Table 11 The relative peak area of characteristic chromatograms of Xinqingduyin Granules under different concentrative temperatures

由綜合評分結果可知，隨著濃縮溫度上升，綜合評分逐漸降低，但無顯著性差異（見表12）。為縮短生產周期，保證成分保留率，選擇80 ℃減壓濃縮作為最佳工藝。

表12 新清毒飲顆粒不同濃縮溫度的指標成分保留率結果Table 12 Results of retention rates of index components in Xinqingduyin Granules under different concentrative temperatures

2.3.3 成型工藝考察 按優選工藝，取“2.3.2”項下提取液，于80 ℃減壓濃縮成含飲片量2 g·g-1的浸膏樣品；稱取浸膏于70 ℃減壓干燥制成浸膏粉，備用。

2.3.3.1 輔料種類篩選 取浸膏粉48 g（相當于181 g飲片量），各2份，分別與糊精、乳糖、可溶性淀粉、甘露醇4 種輔料1∶1 混勻，噴入75%乙醇適量，混勻，制成軟材，過篩，制成顆粒?？疾燔洸臓顟B、制粒難度、成型率、吸濕率等指標以優選輔料種類。

結果顯示，乳糖成型率最高且吸濕性最小，優于可溶性淀粉，甘露醇制得顆粒質地較硬，顏色不均勻，糊精所得顆?？诟胁睿ㄒ姳?3），故優選乳糖為輔料。

表13 新清毒飲顆粒制粒輔料的篩選Table 13 Screening of excipients for granulation of Xinqingduyin Granules

2.3.3.2 輔料用量配比考察 取浸膏粉48 g，各2 份，分別與不同乳糖配比制成顆粒，以顆粒成型性、吸濕性、休止角等為指標考察輔料用量。

結果顯示，當浸膏粉與乳糖用量配比為1∶1.14或1.2∶1.5時，顆粒成型率高，休止角小，吸濕性?。ㄒ姳?4）。為減少服用量，故選擇浸膏粉∶乳糖的比例為1∶1.14。

表14 新清毒飲顆粒輔料用量的考察結果Table 14 Investigation result of excipient dosage of Xinqingduyin Granules

2.3.3.3 矯味劑考察 按上處方配比制成顆粒，經口嘗具有一定苦澀味，故在相關研究[21-22]基礎上優選甜菊素作為本品矯味劑，并通過不同用量的優選考察，當甜菊素用量為成品質量的0.5%時，口感得到改善。故確定本品甜菊素用量為成品質量的0.5%。

2.4 中試工藝及樣品測定 根據實驗室優選的制備工藝，按處方稱取17 味中藥，共181 kg，共3 份，加8 倍量水，煎煮3 次，每次1 h，藥液濾過。合并濾液，80 ℃下減壓濃縮成浸膏（相對密度1.10～1.20，60～70 ℃），加入成品質量0.5 %的甜菊糖苷溶液（濃度約為10 %，m/V），以適量乳糖（浸膏粉∶乳糖=1∶1.14）作輔料，一步制粒，分裝（每袋10 g），即得。中試工藝過程數據的相關結果見表15。依法測定中試提取液、浸膏、顆粒中菊苣酸、甘草酸的含量，計算保留率，并測定各個藥液的特征圖譜，以中試提取液（T601）為參照圖譜，計算相似度，并以5號峰（綠原酸）為參照峰（S），計算各個峰的相對峰面積。結果見圖6和表16、表17。

圖6 新清毒飲顆粒中試工藝提取液-浸膏-顆粒的特征圖譜疊加圖Figure 6 Superimposed characteristic chromatograms of pilotprocess extraction-extractum-granule of Xinqingduyin Granules

表15 新清毒飲顆粒中試工藝的相關結果Table 15 The corresponding results of pilot process steps of Xinqingduyin Granules

表16 新清毒飲顆粒中試工藝提取液-浸膏-顆粒的特征圖譜相對峰面積結果Table 16 The relative peak area of characteristic peaks of pilot-process extraction-extractum-granule of Xinqingduyin Granules

表17 新清毒飲顆粒中試工藝提取液-浸膏-顆粒的指標成分保留率結果Table 17 The results of the retention rate of index component for pilot-process extraction-extractum-granule of Xinqingduyin Granules

2.4.1 中試工藝相關數據結果分析

2.4.1.1 特征圖譜 1～16 號峰在提取液-浸膏-顆粒的工藝過程中（見圖6），以T601色譜圖為參照，中試浸膏、顆粒的特征圖譜相似度分別為0.970、0.973，表明該工藝未對藥液成分種類造成顯著影響；同一工藝步驟中，提取液、浸膏、顆粒各批次樣品之間的相似度均為0.999，提示本中試工藝重復性良好。與提取液比較，顆粒劑中5、7、10、14、15 號峰相對峰面積有所減少，其余峰穩定，表明該工藝對成分的含量稍有影響。見表16。

2.4.1.2 指標成分保留率 從提取液到顆粒的中試工藝過程中（見表17），菊苣酸保留率由（76.11±0.99）%降低至（54.56±1.63）%，甘草酸由（77.96±1.79）%降低至（54.96±1.08）%，表明中試工藝過程成分保留率下降幅度較大。

2.4.2 中試顆粒與同批飲片湯劑比較 湯劑的制備[23]：按處方比例稱取17藥味飲片共181 g，共3份。加水沒過藥面2 cm，浸泡30 min（廣藿香、青蒿、薄荷除外），武火煮開后轉文火煎25 min。加入單獨浸泡30 min 的廣藿香、青蒿、薄荷，繼續煎煮5 min，過濾。藥渣加水沒過藥面2 cm，二次煎煮30 min。過濾，合并濾液，即得新清毒飲湯劑。依法測定湯劑的特征圖譜及指標成分含量，計算保留率，與中試樣品比較分析。

2.4.2.1 特征圖譜分析 依次將3 批湯劑樣品的色譜圖導入“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統軟件（2012 年版）”，以T1 號樣品色譜圖為參照，對3 批樣品色譜峰進行多點校正和Mark 峰匹配，生成對照色譜圖（R0）。同法，依次生成3批中試提取液對照色譜（R1）、浸膏對照色譜（R2）、顆粒對照色譜（R3），取R0～R3 的色譜圖導入上述軟件系統，以R1 為參照圖譜，計算相似度。結果顯示，從湯劑至成分顆粒均可見1～16 號特征峰（見圖7）。R0～R3 相似度結果為1.000、0.975、0.968、0.971，均大于0.96，證明經過中試生產的新清毒飲顆粒與湯劑主要成分相似。

圖7 新清毒飲湯劑-中試顆粒的對照圖譜疊加圖Figure 7 Superimposed reference chromatogram of Xinqingduyin decoction-pilot-process granule

2.4.2.2 指標成分保留率結果 湯劑中菊苣酸、甘草的保留率為（52.88±4.00）%、（45.21±1.71）%，與中試成品顆粒中菊苣酸、甘草酸保留率相比，雖然中試規模生產成品顆粒成分保留率呈現較大幅度降低，但結果均高于湯劑中的成分保留率（見表17和表18），結合特征圖譜，進一步證明新清毒飲顆粒工藝路線的可靠性。

表18 與中試同批飲片制備的新清毒飲湯劑的指標成分保留率Table 18 The retention rate of index component of Xinqingduyin decoction prepared from the same batch of decoction pieces as the pilot-batch

3 討論

3.1 新清毒飲湯劑、小試與中試樣品比較 本研究進行中試驗證前，通過放大投料量，按照優選工藝制備3 批新清毒飲小試顆粒，取制備過程中的提取液、浸膏、顆粒樣品測定特征圖譜及含量，計算指標成分保留率。以提取液樣品的色譜圖為參照，浸膏、顆粒的色譜圖相似度均大于0.9。對小試、中試工藝的樣品及湯劑中指標成分保留率進行比較（見表19），發現中試樣品中菊苣酸、甘草酸的保留率顯著下降，成品顆粒中菊苣酸保留率顯著低于小試工藝樣品的保留率，可能是大規模生產往往加熱時間較長，導致菊苣酸受熱分解，使其保留率下降[16]。中試提取、濃縮過程中甘草酸保留率較高，但在成品顆粒中顯著下降，其原因可能與一步制粒過程中的泵進藥液速度、進風溫度、霧化壓力、噴射速度等影響因素有關[24-25]。但是，新清毒飲顆粒中菊苣酸、甘草酸保留率仍顯著高于新清毒飲湯劑。

表19 新清毒飲顆粒小試、中試工藝與傳統湯劑指標成分的保留率比較[（±s），%]Table 19 Comparison of retention rate of the index component among small-pilot-trail process and traditional decoction of Xinqingduyin Granules[（±s），%]

表19 新清毒飲顆粒小試、中試工藝與傳統湯劑指標成分的保留率比較[（±s），%]Table 19 Comparison of retention rate of the index component among small-pilot-trail process and traditional decoction of Xinqingduyin Granules[（±s），%]

樣品提取液浸膏顆粒小試工藝保留率菊苣酸78.89±3.59 74.66±3.41 67.60±1.74甘草酸58.47±2.81 57.19±3.23 55.42±5.25中試工藝保留率菊苣酸76.11±0.99 62.81±2.55 54.56±1.63甘草酸77.96±1.79 72.51±1.05 54.96±1.08湯劑保留率菊苣酸52.88±4.00甘草酸45.21±1.71

3.2 特征圖譜結果分析 中試樣品色譜圖及相對峰面積結果顯示，新清毒飲顆粒工藝過程樣品與對照圖譜相似度均大于0.9，表明該工藝過程中，樣品主要成分種類未發生顯著變化。5 號峰（綠原酸）、7 號峰（蘆?。?、10 號峰（歸屬金銀花的未知成分）、14 號峰（蒙花苷）、15 號峰（補骨脂素）的相對峰面積RSD 較大，表明這些成分含量存在較大的差異。另外，圖7中保留時間18.5 min處的未標識峰，在成品顆粒中峰面積顯著減少，因此后期研究應關注該成分是否為有效成分，并進一步關注熱不穩定有效成分的降解，通過優化工藝，提高有效成分保留率，以期制備成藥效成分高、質量均一的顆粒劑。

本研究在小試試驗中對整個制備工藝進行考察，確定了新清毒飲初步的生產工藝，利用中試規模加以驗證，對評價工藝放大的穩定性具有重要的意義；所建立的特征圖譜方法適用于新清毒飲顆粒各生產流程的質量評價，為不同工藝過程產物的質量控制提供了參考；中試工藝制得新清毒飲顆粒劑與同批次飲片制得湯劑的比較顯示，特征圖譜相似性高，菊苣酸、甘草酸保留率高，可為中藥復方制劑工藝研究提供參考。