基于網絡藥理學及體內實驗探討射麻止喘液治療中性粒細胞型哮喘的分子機制

連樂燊，孟星汝，黃秀芳，周謹希，謝燕小，陶海瀾，蔣紫云，5，劉小虹（.廣州中醫藥大學東莞醫院，廣東東莞 52000；2.廣州中醫藥大學第一臨床醫學院，廣東廣州 50405；. 廣州中醫藥大學第一附屬醫院，廣東廣州 50405；4. 廣州中醫藥大學嶺南醫學研究中心，廣東廣州 50405；5. 廣州中醫藥大學第三臨床醫學院，廣東廣州 5070）

支氣管哮喘（Asthma）簡稱哮喘，是一種由多種細胞及細胞組分參與的氣道慢性炎癥性疾病[1]。根據痰液中不同的炎癥細胞分布，可分成嗜酸粒細胞型哮喘（Eosinophilic asthma，EA）、中性粒細胞型哮喘（Neutrophilic asthma，NA）、混合細胞型哮喘（Mixed granulocytic asthma，MA）及寡細胞型哮喘（Paucigranulocytic asthma，PA）4 種表型[2]。其中NA 對激素的治療反應性差，臨床癥狀比其他類型的哮喘更難控制，但其具體機制尚未完全明確[3-4]。

射麻止喘液是廣州中醫藥大學第一附屬醫院根據治療哮喘的臨床驗方生產的醫院制劑（粵藥制字Z20071338），具有宣肺平喘、通絡解痙、化痰止咳的功效，用于支氣管哮喘及喘息性急慢性支氣管炎發作期。臨床研究顯示，射麻止喘液能改善支氣管哮喘急性發作患者的臨床癥狀[5]、肺功能[6]及外周血清炎癥因子白細胞介素5（IL-5）、IL-8 水平[7]。本課題組前期研究表明，射麻止喘液能調節哮喘模型動物的環磷酸腺苷（cAMP）、環磷酸鳥苷（cGMP）失衡，改善炎癥反應[8]，減輕氣道平滑肌細胞增殖[9]，但其對NA 的作用機制尚不清楚。故本研究基于網絡藥理學方法及體內實驗驗證探討射麻止喘液對NA 的作用機制，以期為其臨床應用提供更多的實驗依據。

1 材料與方法

1.1 動物 雌性6～8 周齡BALB/C 小鼠30 只，SPF級，體質量18～22 g，購自浙江維通利華實驗動物技術有限公司，實驗動物生產許可證號：SCXY（浙）2019-0001。動物飼養在廣州中醫藥大學動物實驗中心，實驗動物使用許可證號：SYXK（粵）2018-0001，環境溫度：22～24 ℃，濕度：40%～50%，光照條件：12 h 明暗交替，動物自由攝食飲水。本動物實驗經廣州中醫藥大學實驗動物倫理委員會批準，批文號：20221014004。

1.2 藥物及主要試劑 射麻止喘液（組方：麻黃、射干、地龍、杏仁、半夏、細辛、桔梗、椒目、甘草），由廣州中醫藥大學第一附屬醫院提供，批號：20220901。雞卵清白蛋白（OVA，純度≥98%，貨號：A5503）、弗氏完全佐劑（CFA，貨號：F5881），德國Sigma 公司；醋酸地塞米松片（DEX），新鄉市長樂藥業有限公司，貨號：H41020216；p-mTOR 抗體，武漢愛博泰克生物科技有限公司，貨號：Ap0094；HE染色試劑盒，武漢賽維爾生物科技有限公司，貨號：G1076；IL-8 ELISA 檢測試劑盒，深圳欣博盛生物科技有限公司，貨號：EMC104；Primer Script-RT（貨號：RR047A）、TB Green Premix Ex TaqTM（貨號：RR820A），日本TaKaRa公司。

1.3 主要儀器 HY-JSE01 型小動物霧化給藥儀，北京元森凱德生物技術有限公司；Nanodrop 2000 型超微量紫外可見分光光度計、多功能酶標儀，美國Thermo Scientific 公司；Quant StudioTM5 Real-Time 熒光定量PCR 儀，美國ABI 公司；低溫高速臺式離心機，美國Beckman 公司；Pannoramic MIDI 數字病理切片掃描系統，匈牙利3D HISTEC 公司；顯微鏡，日本尼康公司。

1.4 射麻止喘液活性成分及其作用靶點篩選 射麻止喘液由麻黃、射干、地龍、杏仁、半夏、細辛、桔梗、椒目、甘草9味中藥組成，利用中藥系統藥理學數據庫和分析平臺（TCMSP，http：//tcmspw.com/tcmsp.php）檢索射麻止喘液中除地龍外的其余8味藥的化學成分，并以口服生物利用度（Oral bioavailability，OB）≥30%、類藥性（Drug likeness，DL）≥0.18 為條件，篩選出射麻止喘液的活性成分；動物藥地龍通過文獻檢索及Swiss ADME 數據庫（http：//www.swissadme.ch/index.php）篩選獲得活性成分。運用TCMSP 數據庫及SwissTargetPrediction 平 臺 （http：//www.swisstargetprediction.ch）預測射麻止喘液活性成分的作用靶點，將候選化合物及其對應靶點導入Excel 軟件，并使用Uniprot蛋白質數據庫（https：//www.uniprot.org）獲取規范基因名稱，去重后得到射麻止喘液的活性成分-作用靶點數據集。

1.5 NA 疾病相關靶點篩選 利用OMIM（http：//www.omim.org）、GeneCards（https：//www.genecards.org）、DisGeNET（https：//www.disgenet.org）及DrugBank（https：//go.drugbank.com）數據庫，以“Neutrophilic asthma”為關鍵詞進行檢索，獲得NA 疾病相關靶點。將GeneCards 數據庫中檢索出的疾病靶點以“Relevant Score”所在的隊列數值為目標，計算該列中位數，篩選出“Relevant Score”值＞中位數的靶點，并與其他數據庫篩選出的靶點合并、去重后，得到NA 疾病相關靶點。

1.6 “中藥-活性成分-潛在作用靶點”網絡構建 通過微生信平臺（https：//bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/index.html）對上述預測得到的射麻止喘液活性成分作用靶點與NA 疾病相關靶點取交集并生成韋恩圖，即得到射麻止喘液治療NA 的潛在作用靶點（共有靶點）。分別將射麻止喘液所含中藥、活性成分及共有靶點導入Cytoscape 3.8軟件，構建“中藥-活性成分-潛在作用靶點”網絡。

1.7 潛在作用靶點的蛋白互作（PPI）網絡構建 將射麻止喘液治療NA 的潛在作用靶點上傳至STRING 數據庫（https：//www.string-db.org），模式選擇“Multiple Protein”，物種選擇“Homo sapiens”，選取置信度（Minimum required interaction score）＞0.4，建立潛在作用靶點PPI 網絡。將PPI 網絡關系保存為Tsv 文件，導入Cytoscape 3.8 軟件中，進一步使用內置Mcode 插件分析獲得核心靶點。

1.8 潛在作用靶點的GO 功能及KEGG 通路富集分析 使用Metascape 平臺（http：//metascape.org/gp/index）對射麻止喘液治療NA 的潛在作用靶點進行基因本體（GO）、京都基因和基因組百科全書（KEGG）通路富集分析；以P＜0.05對結果進行篩選，獲得射麻止喘液治療NA 的生物過程（Biological Process，BP）、細胞組分（Cellular Component，CC）、分子功能（Molecular Function，MF）以及信號通路。分別將篩選得到的GO 功能富集分析結果前10 項及KEGG 通路富集分析結果前20 項導入微生信平臺進行可視化。

1.9 體內實驗

1.9.1 分組、模型復制及給藥 將BALB/C 小鼠適應性喂養1 周后，隨機分為空白組、NA 模型組、射麻止喘液低劑量組、射麻止喘液高劑量組、地塞米松對照組，每組6 只。通過腹腔注射致敏劑（OVA+CFA）及霧化吸入激發的方法復制NA 小鼠模型[10-11]。①致敏階段：除空白組外，其余各組小鼠在第0、7、14 天分別腹腔注射20 μg OVA+75 μg CFA（0.3 mL）致敏，空白組小鼠腹腔注射等量生理鹽水。②激發給藥階段：第21～30天，采用霧化箱進行霧化激發，激發藥物為5% OVA 混懸液（每次8 mL，每次霧化時間40 min，每天1 次），空白組采用等量生理鹽水霧化。同時于霧化激發前1 h 灌胃或腹腔注射給藥，每天1次。按照人與動物間體表面積折算等效劑量，射麻止喘液低、高劑量組分別按照2.5、10 g·kg-1劑量灌胃給藥；空白組及NA 模型組給予10 mL·kg-1生理鹽水灌胃；地塞米松對照組腹腔注射1 mg·kg-1地塞米松，每天1次。

1.9.2 肺組織病理學觀察 取小鼠肺組織置于4%多聚甲醛溶液中固定48 h 后，剪去多余結締組織；采用乙醇梯度脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，切成約4 μm薄片；二甲苯脫蠟，乙醇梯度洗脫后，進行HE常規染色，封片后在顯微鏡下觀察，并用數字病理切片掃描系統采集圖像。

1.9.3 ELISA 法檢測肺泡灌洗液中IL-8 含量 將小鼠麻醉后固定于取材臺上，充分暴露氣管，留置固定導管，暴露胸腔；用無菌手術線結扎右肺，使用1 mL 注射器抽取0.3 mL 預冷的生理鹽水，勻速自導管注入左肺后回抽（回抽率80%以上），反復抽吸3 次；將留取的肺泡灌洗液（BALF）以4 ℃、2 000 r·min-1（離心半徑8 cm）離心5 min，吸取上清液，-80 ℃保存。嚴格按照ELISA試劑盒說明書步驟操作，測定肺泡灌洗液中IL-8含量。

1.9.4 RT-qPCR法檢測肺組織NLRP3、CXCR2 mRNA表達水平 采用TRIzol 法提取小鼠肺組織總RNA，檢測RNA 含量和純度。采用Prime Script-RT 試劑盒進行逆轉錄反應，反應條件：42 ℃、15 min，85 ℃、5 min，將提取的總RNA 轉錄為cDNA。然后采用TB Green Premix Ex TaqTM試劑盒進行PCR擴增反應，反應條件：95 ℃預變性10 min，95 ℃變性15 s，退火，60 ℃延伸30 s，共40 個循環；熔解曲線分析范圍：65～95 ℃，每5 s 升溫0.5 ℃，每0.5 ℃記錄1 次熒光信號；實驗重復3 次。以β-actin 為內參，采用2-△△Ct法計算目的基因相對表達量。引物序列由北京擎科生物科技股份有限公司提供，見表1。

表1 PCR 引物序列表Table 1 Primer sequences of PCR

1.9.5 免疫組化法檢測肺組織p-mTOR蛋白表達水平取肺組織石蠟切片，脫蠟并清洗后，用0.01 mol·L-1檸檬酸鹽緩沖液煮沸熱修復抗原；室溫冷卻后用PBS清洗3 次，山羊血清室溫下孵育；PBS 清洗3 次后，加入一抗p-mTOR（稀釋比例1∶50），4 ℃下孵育過夜；室溫下復溫后PBS 清洗3 次，滴加酶標二抗，室溫下孵育1 h；PBS 清洗3 次，滴加DAB 顯色液顯色5～10 min；PBS 清洗，蘇木素復染約3 min 后常規脫水；二甲苯透明，干燥后樹脂封固；在光學顯微鏡下觀察，棕黃色為陽性表達。

1.10 統計學處理方法 采用SPSS 25.0 統計軟件進行數據分析；計量資料以均數±標準差（±s）表示；多組間比較采用單因素方差分析（One-way ANOVA），兩兩比較采用LSD 檢驗，方差不齊則采用非參數檢驗；以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 射麻止喘液治療NA 的“中藥-活性成分-潛在作用靶點”網絡 結果共篩選得到射麻止喘液活性成分作用靶點826 個，NA 疾病相關靶點154 個。對射麻止喘液活性成分作用靶點與NA 疾病相關靶點取交集，即得到射麻止喘液治療NA的51個潛在作用靶點（共有靶點），生成韋恩圖見圖1。

圖1 射麻止喘液治療中性粒細胞型哮喘（NA）的潛在作用靶點Figure 1 Potential targets of Shema Zhichuan Liquid in the treatment of neutrophilic asthma

分別將射麻止喘液所含中藥、活性成分及共有靶點導入Cytoscape 3.8軟件，構建“中藥-活性成分-潛在作用靶點”網絡，見圖2。該網絡由205 個節點（9 個中藥、145 個活性成分、51 個潛在作用靶點）、667 條邊構成，節點之間的連線表示藥物、活性成分、靶點基因之間的作用關系。通過對該網絡拓撲參數進一步分析，根據度值（Degree）大小進行排列，排前5 位的活性成分為：槲皮素、木犀草素、山柰酚、豆甾醇、柚皮素，見表2；排前5 位的潛在作用靶點為：ESR1、ADRB2、CASP1、MAPK1、RELA。上述活性成分和靶點可能在射麻止喘液治療NA 中發揮關鍵作用。

圖2 射麻止喘液治療中性粒細胞型哮喘的“中藥-活性成分-潛在作用靶點”網絡Figure 2 “Chinese medicinals-active components-potential targets” network of Shema Zhichuan Liquid in the treatment of neutrophilic asthma

表2 射麻止喘液治療中性粒細胞型哮喘的關鍵活性成分Table 2 Key active components of Shema Zhichuan Liquid in the treatment of neutrophilic asthma

2.2 射麻止喘液治療NA 潛在作用靶點的PPI 網絡將射麻止喘液治療NA 的51 個潛在作用靶點導入STRING 數據庫構建PPI網絡，去除2個游離節點，該網絡由49 個節點、568 條邊組成，見圖3-A。利用Cytoscape 3.8 軟件的內置插件Mcode 對該PPI 網絡進行參數特征計算，共得到29 個核心靶點（見圖3-B），包括AKT1（蘇氨酸蛋白激酶1）、IL6（白細胞介素6）、TNF（腫瘤壞死因子）、EGFR（表皮生長因子）、NLRP3（NOD 樣受體熱蛋白結構域相關蛋白3）、RELA（核因子κB）、MIF（巨噬細胞移動抑制因子）、CXCR2（CXC 趨化因子受體2）、VEGFA（血管內皮生長因子A）等，各節點Degree 值接近，越靠近中心表示該靶點越重要。

圖3 射麻止喘液治療中性粒細胞型哮喘的潛在作用靶點PPI 網絡Figure 3 PPI network of potential targets of Shema Zhichuan Liquid in the treatment of neutrophilic asthma

2.3 潛在作用靶點的GO 功能及KEGG 通路富集分析 通過Metascape 平臺對射麻止喘液治療NA 的潛在作用靶點進行GO 功能及KEGG 通路富集分析，結果見圖4。GO 功能富集分析（見圖4-A）得到882 個生物學過程條目，主要包括細胞對脂多糖、細菌來源分子、生物刺激、脂質的反應及炎癥反應等；33個細胞組分條目，主要集中在細胞膜閥、細胞質核周區、細胞質囊泡腔、細胞膜微區等；61 個分子功能條目，包括各種因子結合、糖胺聚糖結合、受體蛋白結合等。KEGG 通路富集分析（見圖4-B）共得到142 條信號通路（P＜0.05），大多數靶點富集在癌癥通路、TNF 信號通路、甲型流感信號通路、Toll 樣受體通路、MAPK信號通路、mTOR信號通路等。

圖4 射麻止喘液治療中性粒細胞型哮喘的潛在作用靶點的GO 功能及KEGG 通路富集分析Figure 4 GO enrichment analysis and KEGG pathway enrichment analysis of potential targets of Shema Zhichuan Liquid in the treatment of neutrophilic asthma

2.4 射麻止喘液對NA 小鼠肺組織病理變化的影響結果見圖5?？瞻捉M小鼠的氣道黏膜上皮結構完整，各層次結構排列整齊，未見明顯壞死、脫落以及炎癥細胞浸潤，且肺泡結構正常、間隔較薄，間質無明顯纖維組織增生。與空白組比較，NA 模型組小鼠的氣道黏膜上皮結構破損、紊亂，有局灶性脫落，氣管及血管周圍伴有大量的炎性細胞浸潤，可見部分區域黏液腺、平滑肌增生，伴有部分黏膜下層充血、水腫，且肺泡壁明顯增厚，肺泡腔縮小。與NA模型組比較，射麻止喘液低、高劑量組小鼠肺組織支氣管上皮細胞結構排列可見少許紊亂，氣管及血管周圍有少量的炎性細胞浸潤，支氣管黏膜充血水腫明顯減輕。而地塞米松對照組的改善不明顯，可見氣道黏膜上皮結構破壞，氣管及血管周圍有大量炎性細胞聚集，黏膜充血、水腫等。結果提示，射麻止喘液能改善NA小鼠的肺組織病理損傷。

圖5 射麻止喘液對中性粒細胞型哮喘（NA）小鼠肺組織病理變化的影響（HE 染色，×200）Figure 5 Effect of Shema Zhichuan Liquid on histomorphological changes in the lung tissue of neutrophilic asthma mice（HE staining，×200）

2.5 射麻止喘液對NA 小鼠肺泡灌洗液中炎癥因子IL-8 水平的影響 結果見圖6。與空白組比較，NA模型組小鼠肺泡灌洗液中的IL-8 水平明顯升高（P＜0.05）。與模型組比較，射麻止喘液高劑量組小鼠肺泡灌洗液中的IL-8 水平明顯降低（P＜0.05）。射麻止喘液低劑量組及地塞米松對照組小鼠肺泡灌洗液中的IL-8 水平無明顯變化（P＞0.05）。結果提示，射麻止喘液能改善NA小鼠的氣道炎癥反應。

圖6 射麻止喘液對中性粒細胞型哮喘（NA）小鼠肺泡灌洗液中IL-8 水平的影響（±s，n=3）Figure 6 Effect of Shema Zhichuan Liquid on the level of IL-8 in bronchoalveolar lavage fluid of neutrophilic asthma mice（±s，n=3）

2.6 射麻止喘液對NA 小鼠肺組織NLRP3、CXCR2 mRNA 表達及p-mTOR 蛋白表達的影響 結果見圖7。與空白組比較，NA 模型組小鼠肺組織NLRP3、CXCR2 mRNA 表達顯著上調（P＜0.01），p-mTOR 蛋白表達水平（棕色為陽性表達）明顯升高。與NA 模型組比較，射麻止喘液低劑量組小鼠肺組織NLRP3 mRNA 表達明顯下調（P＜0.05），射麻止喘液低、高劑量組小鼠肺組織CXCR2 mRNA 表達顯著下調（P＜0.01），p-mTOR蛋白表達水平明顯降低。

圖7 射麻止喘液對中性粒細胞型哮喘（NA）小鼠肺組織中CXCR2、NLRP3 mRNA 表達及p-mTOR 蛋白表達的影響Figure 7 Effects of Shema Zhichuan Liquid on mRNA expressions of CXCR2，NLRP3 and protein expression of p-mTOR in lung tissue of neutrophilic asthma mice

3 討論

研究[1]表明，哮喘是一種異質性疾病，其在不同患者個體間存在差異。異質性與中醫學的“同病異治”有異曲同工之意，不同炎癥表型的哮喘患者具有不同的中醫發病病機[12]。有研究[7]認為，中性粒細胞型哮喘（NA）多由風邪羈戀不散，引動體內宿痰所致，故治療NA 宜從風痰論治，以“祛風化痰”為基本治則。射麻止喘液由《金匱要略》中的射干麻黃湯化裁而來，具有疏風化痰、解痙平喘的功效，符合NA 的中醫病機。前期臨床及實驗研究[5-9]已證實射麻止喘液對哮喘療效確切，然而其對NA 的分子作用機制尚不清晰。因此，本研究通過網絡藥理學方法[13]探究了射麻止喘液對NA 的作用機制，并進行了動物實驗驗證。

本研究篩選出射麻止喘液中治療NA 的主要活性成分包括槲皮素、木犀草素、山柰酚、豆甾醇、柚皮素等。槲皮素具有抗氧化損傷、抗炎、抗癌等藥理作用，相關研究[14-15]顯示，其能夠降低哮喘氣道敏感性，抑制氣道炎癥。木犀草素能通過調控MAPK/AP-1、JAK-STAT 等多種炎癥信號通路，改善NA 發生發展中的氣道炎癥[16]。山柰酚可以抑制經典炎癥通路激活，減少肥大細胞釋放組胺及炎癥因子IL-6、TNF-α，從而有效減輕肺部炎癥[17-18]。柚皮素可抑制Th2 炎性細胞產生炎癥因子，調節細胞免疫平衡，從而減緩哮喘的發生發展[19]。以上結果提示，射麻止喘液活性成分可能通過參與炎癥反應、氧化應激、免疫平衡途徑在治療NA中發揮作用。

通過構建潛在作用靶點PPI 網絡，進一步分析預測了射麻止喘液治療NA 的核心靶點，包括NLRP3（NOD 樣受體熱蛋白結構域相關蛋白3）、CXCR2（CXC 趨化因子受體2）、MIF（巨噬細胞移動抑制因子）、EGFR（表皮生長因子）、RELA（核因子κB）等。NLRP3 炎癥小體是固有免疫系統識別受體家族主要成員之一，在NA 的發病機制中具有重要作用[20]，NLRP3 炎性小體活化能夠促進Caspase-1 的產生及炎癥因子釋放，誘導炎癥反應，進而促進中性粒細胞募集[21]。有研究[22]發現，OVA 誘導小鼠致敏后NLRP3表達與小鼠氣道高反應呈正相關。使用NLRP3 抑制劑可有效減輕哮喘患者的氣道高反應性[23]。中性粒細胞是哮喘免疫發病機制中的關鍵炎癥細胞，可通過CXC 趨化因子激活CXCR2 而啟動，進而被募集至哮喘患者氣道中，加劇哮喘進展[24]。有研究[25]表明，通過抑制CXCR2 過表達可抑制中性粒細胞向肺部遷移，從而減少重癥哮喘患者誘導痰中的中性粒細胞水平。本研究結果顯示，射麻止喘液能夠下調NA 小鼠肺組織NLRP3、CXCR2 mRNA 表達，降低炎癥因子IL-8水平，說明射麻止喘液有抑制NA 的中性粒細胞性炎癥反應的作用。

KEGG 通路富集分析顯示，射麻止喘液治療NA的主要通路包括TNF 信號通路、MAPK 信號通路、Toll 樣受體信號通路、mTOR 信號通路等。TNF 介導了炎癥反應、細胞免疫、腫瘤免疫等多種生理病理過程。TNF 通路激活促進炎癥介質釋放，如TNF-α、IL-8 等進行轉錄，趨化相關炎癥細胞聚集，形成進一步放大炎癥反應的信號[26-28]；IL-8 是中性粒細胞活化的標志[29]，可激活中性粒細胞向氣道聚集浸潤，從而導致氣道高反應及加劇炎癥反應[30]。當TNF通路傳導異常時，可激活肺泡上皮細胞中的趨化因子受體CXCR2，進而募集中性粒細胞，放大肺部炎癥的連鎖反應，加速炎癥發展[31]。MAPK 是調控細胞炎性反應的重要信號傳導系統，是哮喘發生發展的另一條重要途徑[32]。當氣道上皮細胞受到刺激后，能激發p38MAPK 磷酸化后大量釋放炎性介質，引發氣道炎性反應[33]。被激活的MAPK 進一步激活下游相關通路，調控多種炎性細胞因子轉錄，如促進炎癥小體NLRP3表達，加速NA發生發展[34]。Toll 樣受體（Tolllike receptors，TLRs）是固有免疫系統的主要組成部分，已被證實能夠調控哮喘氣道炎癥、氣道高反應性及氣道重塑的發生[35]，其激活后能調控免疫系統促進炎性細胞因子和趨化因子的釋放，誘導炎癥反應的發生[36]。mTOR 信號通路在自噬、細胞生長增殖、分化存活等方面具有重要作用[37]，其介導的自噬途徑參與了NA 表型的氣道炎癥、氣道重塑和氣道高反應性等過程[38]。mTOR 過度表達會抑制自噬，導致氣道出現中性粒細胞性炎癥，引起巨噬細胞內NLRP3 炎性小體形成增多，并刺激炎癥因子產生，加劇氣道炎癥及導致氣道反應性增高[39-40]。因此，抑制mTOR、NLRP3 炎性小體及CXCR2 表達能減輕NA 的氣道炎癥反應。本研究結果顯示，射麻止喘液能改善NA 小鼠肺組織炎性細胞浸潤，降低IL-8 水平，可能與其抑制mTOR通路激活自噬途徑有關。

綜上所述，射麻止喘液可能是通過槲皮素、木犀草素、山柰酚等主要活性成分，作用于NLRP3、CXCR2等核心靶點，調控TNF信號通路、MAPK信號通路、Toll 樣信號通路、mTOR 等關鍵信號通路，發揮抑制氣道炎癥反應、促進中性粒細胞凋亡、緩解氣道重塑的作用，從而達到治療NA 的目的。本研究可為射麻止喘液治療NA 的進一步實驗及臨床研究提供參考，但相關研究結果仍有待進一步的生物學驗證。