卵巢高分化黏液性癌患者中MMP—2、MMP—9、S100A14的表達

胡倩倩　嚴浩　李盛

[摘要]目的：探討卵巢高分化黏液性癌（highly differentiated Ovarian mucinous carcinoma，HDOMC）患者中MMP-2、MMP-9、S100A14的表達水平及意義。方法：采用免疫組化法對40例正常卵巢組織、43例卵巢黏液性腫瘤（Ovarian mucinous tumor，OMT）、80例HDOMC患者中MMP-2、MMP-9、S100A14的表達水平進行檢測，并分析HDOMC患者中S100A14表達與MMP-2、MMP-9表達的相關性。結果：MMP-2、MMP-9、S100A14在正常卵巢組織、OMT、HDOMC患者中的表達水平呈遞增趨勢，且兩兩組間比較差異顯著（P<0.05）。Spearman相關分析：HDOMC患者中S100A14表達與MMP-2、MMP-9表達水平兩兩呈正相關（P<0.05）。MMP-2、MMP-9、S100A14表達水平與HDOMC患者手術-病理分期（FIGO）、CA-125水平有關（P<0.05）；與年齡、腫瘤直徑、淋巴結轉移無關（P>0.05）。結論：MMP-2、MMP-9、S100A14表達水平升高與HDOMC發生、進展、早期轉移具有顯著相關性，早期聯合篩查這些指標對HDOMC病情演變及治療預后評估具有重要價值。

[關鍵詞]黏液性癌；表達水平；聯合篩查；病理分期；相關性

卵巢癌（ovarian cancer，OC）是近年來臨床最常見的一種女性生殖系統惡性腫瘤，其發病隱匿，在疾病早期可無明顯癥狀，70%～80%患者發現時即己為晚期，死亡率極高。因此，近年來，臨床一直在尋找對早期卵巢癌監測對其侵襲、轉移具有重要預測價值的標志物。大量研究發現，MMPs在多種腫瘤組織中表達水平升高且與腫瘤侵襲、轉移具有顯著相關性。MMP2、MMPO是目前臨床研究發現與腫瘤發生、發展關系最為密切的一組MMP成員；通過降低細胞外基質水平促進癌細胞浸潤，導致惡性腫瘤發生早期轉移。已有研究表明S100A14基因水平在多種腫瘤患者中呈現高表達狀態，S100A14以p53依賴方式對腫瘤患者MMP-2表達水平進行上調，促進細胞侵襲，導致惡性腫瘤預后不良。本研究通過免疫組化法，探討MMP-2、MMP-9、S100A14在HDOMC患者中的表達水平及其監測意義?，F報道如下。

1.資料和方法

1.1臨床資料

隨機選擇我院2010年7月至2014年8月收治的80例HDOMC患者，均經手術切除病理證實為HDOMC。納入標準：病理類型為高分化黏液性癌；KPS評分>90分，預計生存時間>3個月；年齡25～76歲。入選患者平均（49.5±8.7）歲，FIGO分期：早期（Ⅰ～Ⅱ期）27例、晚期（Ⅲ～Ⅳ期）53例，術前均未采用過放化療治療，并排除合并其他惡性腫瘤者。選取同期40例因子宮肌瘤行子宮及附件全切的正常卵巢組織患者，43例OMT患者作為對照研究，年齡24-73歲，平均（47.8±8.6）歲。

1.2方法

S100A14兔多克隆抗體，MMP-2、MMP-9單抗以及sP試劑盒均由中杉金橋公司提供，批號分別為20141102、20150301、20150403、201/1204，嚴格按照試劑盒說明書進行染色，石蠟切片經脫蠟、酒精水化、微波爐抗原熱修復。后經DAB染色、蘇木精復染，最后采用中性樹膠進行封閉。以實驗前期檢查S100A14為陽性的HDOMC組織作陽性對照，以PBS代一抗作陰性對照。S100A14、MMP-2、MMP-9陽性判斷標準：顯微鏡下染色強度為胞漿和胞膜呈淺黃色至棕黃色，且典型分布于膜部分，排除完全脫片的無效標本，所有切片均通過Apefio病理掃描，用Apefio Image Scope軟件分析蛋白表達量。每張切片隨取6～10個部位用于S100A14、MMP-2、MMP-9表達水平的檢測分析。

1.3統計學方法

采用SPSS13.0軟件統計分析，計量資料以（x±s）表示，組間采用t檢驗，計數資料以n（%）表示，采用x2檢驗；采用Pearson進行相關性檢驗，P<0.05則差異有統計學意義。

2.結果

2.1不同標本組織MMP-2、MMP-9、S100A14表達水平差異

MMP-2、MMP-9、S100A14在正常卵巢組織、OMT、HDOMC患者中的表達水平呈遞增趨勢，且兩兩組間比較差異顯著（P<0.05）。見表1。

2.2MMP-2、MMP-9、S100A14在HDOMC患者中的表達情況

MMP-2、MMP-9、S100A14表達水平與HDOMC患者手術-病理分期（FIGO）、CA-125水平有關（P<0.05）；與年齡、腫瘤直徑、淋巴結轉移無關（P>0.05）。見表2。

2.3HDOMC患者中MMP-2、MMP-9、S100A14表達水平的相關性

Spearman相關分析：HDOMC患者中S100A14表達與MMP-2、MMP-9表達水平兩兩呈正相關（r=0.773，P<0.05；r=0.653，P<0.05）。

3.討論

卵巢癌己成為近年來嚴重危害女性身心健康的殺手之一，其死亡率居于婦科惡性疾病之首，據調查統計，其5年存活率僅25%～30%。因此，臨床一直致力于尋求一種能夠靈敏地反映卵巢癌早期病變、演變的實驗室客觀指標，對早期癌變篩查、延長病人生命具有重要價值。本實驗通過檢測MMP-2、MMP-9、S100A14在HDOMC組織中表達，以探討這些指標是否可作為HDOMC疾病篩查、演變以及預后地評估指標。

侵襲、轉移是惡性腫瘤治療失敗以及后期死亡的主要原因，多基因參與其中，是一個復雜的病理過程。有報道稱S100A14蛋白與腫瘤密切相關。己有研究證實，S100A14基因在多種腫瘤細胞的RNA上高表達，在乳腺、卵巢、宮頸以及子宮內膜等婦科癌癥中表達水平上調，在結直腸癌、細胞癌中表達水平下調。目前臨床對于S100A14在HDOMC中的研究資料尚少。浸潤是個主動過程，細胞浸潤關鍵在于可水解細胞外基質（ECM）成分及穿越基底膜。婦產科領域腫瘤疾病均發現MMPs異常表達，并且其水平高低和癌腫分期、預后存在密切相關性，可作為早期癌癥診斷的重要監測指標。MMP-2是MMPs家族成員之一，它通過降解ECM和穿越基底膜，破壞局部組織結構，有利于癌細胞侵襲；MMP-2不但對基底膜糖蛋白、ECM成分起到降解作用，且對腫瘤新生血管的生產也具有重要促進作用，為新生血管開辟道路。MMP-9是MMPs家族中分子量最大酶，主要降解破壞ECM成分中的Ⅳ、Ⅴ型膠原以及明膠。本研究結果顯示，MMP-2、MMP-9、S100A14在HDOMC組織中表達明顯高于OMT及正常卵巢組織；MMP-2、MMP-9、S100A14表達水平與HDOMC患者手術病理分期（FI-GO）、CA-125水平有關（P<0.05）；與年齡、腫瘤直徑、淋巴結轉移無關（P>0.05）。這可能與樣本量少等主觀因素有關。由此推測，MMP-2、MMP-9、S100A14表達水平可作為HDOMC的有效篩查指標。

聯合多個基因，探討腫瘤發病機制和尋求靈敏度較高的腫瘤早期篩查指標是當前臨床研究的焦點、熱點。本研究在上述基礎上繼續探討MMP-2、MMP-9、S100A14之間的相關性，以揭示其在HDOMC疾病中的意義。Spearman相關分析顯示，HDOMC患者中S100A14表達與MMP-2、MMP-9表達水平兩兩呈正相關（P<0.05）。有研究證明，S100A14可激活乳腺癌中的信號通路，下調野生型p53基因，從而上調MMP-2、MMP-9蛋白表達，促進癌細胞發生侵襲、轉移。但其在OC中細胞信號機制，尚待進一步研究。由實驗推測，S100A14與MMP-2、MMP-9之間具有協同作用，S100A14可能通過上調MMP-2、MMP-9表達，促使癌細胞侵襲、轉移。本實驗為遏制OC侵襲性生長提供了新的可能，以期改善病人預后。

綜上所述，MMP-2、MMP-9、S100A14表達水平升高與HDOMC發生、進展、早期轉移具有顯著相關性，早期聯合篩查這些指標對HDOMC病情演變及治療預后評估具有重要價值。