不孕不育患者解脲支原體、沙眼衣原體及淋病奈瑟氏菌感染狀況調查

趙本書　牟玲

[摘要]目的：探討解脲支原體、沙眼衣原體、淋病奈瑟氏菌感染與不孕不育的相關性。方法：選取2012年8月至2015年8月于我院診治的不孕不育癥患者800例納入不孕不育組，另選取同期于我院健康體檢或產檢者800例納入健康對照組。采用熒光定量PCR儀測定兩組患者解脲支原體、沙眼衣原體及淋病奈瑟氏菌DNA。結果：與健康對照組相比，不孕不育組患者解脲支原體感染、沙眼衣原體感染、解脲、沙眼衣原體同時感染、淋病奈瑟氏菌感染率明顯較高（P<0.05）。不孕不育組130對夫妻中丈夫和妻子的解脲支原體、沙眼支原體感染率分別為62.3%、59.2%、44.6%、39.2%，其夫妻間感染解脲支原體、沙眼支原體具有相關性（r=0.864，P<0.05；r=0.773，P<0.05）。結論：生殖道解脲支原體、沙眼衣原體、淋病奈瑟氏菌感染與不孕不育相關，有必要對不孕不育夫妻同時檢測解脲支原體、沙眼衣原體、淋病奈瑟氏菌DNA。

[關鍵詞]解脲支原體；沙眼衣原體；淋病奈瑟氏菌；不孕不育；相關性

解脲支原體、沙眼衣原體及淋病奈瑟氏菌通過性接觸傳播引起的泌尿生殖系統感染在臨床上越來越常見。由于這些病原體對人類生殖健康有著重要的不良影響，因此感染者往往容易出現不孕不育癥。隨著分子生物學及分子診斷學的快速發展，泌尿生殖系統感染病原體的檢測方法由傳統的培養法、普通免疫法、PCR逐漸發展為實時熒光定量PCR法。實時熒光定量PCR法除了有高效、靈敏度高、特異性高等PCR特點及精確定量的光譜技術特點外，由于該技術全程檢測反應均為全封閉，使PCR擴增產物污染的問題得到了根本的解決，因此還有污染小的特點，該技術的應用使泌尿生殖系統感染病原體DNA檢測具有劃時代的意義，使臨床檢測及基礎研究的數據來源更加及時、可靠。本研究應用實時熒光定量PCR法測定不育不孕癥患者解脲支原體、沙眼衣原體及淋病奈瑟氏菌DNA，探討這些病原體感染予不孕不育的相關性。

1.資料及方法

1.1一般資料

選取2012年8月至2015年8月于我院診治的不孕不育癥患者，階段整群抽樣選取800例，納入不孕不育組，納入標準：（1）1年未采取任何避孕措施，性生活正常而沒有成功妊娠；（2）所有患者自愿參加本研究并簽署知情同意書。排除標準：（1）合并嚴重器官功能障礙；（2）有精神障礙或不配合檢查者。年齡20-45歲，平均（28.9±3.5）歲，男425例，女375例；其中有130對為不孕不育夫妻。另選取同期于我院健康體檢或產檢者800例納入健康對照組，年齡18～47歲，平均（29.3±3.8）歲，男452例，女348例。性別、年齡在不孕不育組與健康對照組間比較差異無統計學意義（P>0.05），具有良好的可比性。

1.2檢測儀器與試劑盒

采用ABI-7500全自動熒光定量PCR儀及中山大學達安基因股份有限公司生產的試劑盒測定解脲支原體、沙眼衣原體及淋病奈瑟氏菌DNA（生產批號：S20150093）。

1.3取標本及處理

所有取標本操作均由婦產科及泌尿外科醫生完成。（1）女性標本：先用干凈棉簽抹掉子宮頸外口分泌物，在用一次性女性專用無菌棉簽在宮頸管內旋轉3圈，取宮頸管內分泌物于配套管內。（2）男性標本：將一次性男性專用拭子伸入尿道內3cm后旋轉幾圈，停留半分鐘后取出置于配套管內。標本取好后立即封閉并送檢。標本處理及提取DNA過程由檢測專業人員嚴格按照說明書進行：將棉拭子從生物安全柜中取出后置于EP管內，加入1.5mL無菌生理鹽水充分混勻懸浮后去掉棉拭子，將EP管放入離心機內以12000r/min離心3min，去掉上清留取沉淀備用。

1.4擴增DNA及判定結果

將2uL標本DNA、陽性定量參考物及質控品DNA先后加入擴增管內，置于離心機以8000r/min離心5s后放進全自動熒光定量PCR儀進行擴增，每次檢測均分為空白對照、陰性及陽性。PCR儀參數設定：93℃3min預變；93℃45s后進入55℃lmin持續10個循環當作熒光本底信號；93℃ 30s后進入55℃45s持續30個循環，在55℃時可收集熒光。用ct值代表擴增結果，為使標準曲線效果最佳，需根據陽性定量參考品結果進行分析并對基線及閾值進行調整，使線性相關系數r在0.97以上。結果判定：ct值在30及以上或增長曲線未表現為s型則代表標本DNA量比檢測極限少，記錄為陰性；反之則為陽性。

1.5統計學方法

將本組數據錄入SPSS19.0進行分析，計數資料行x2檢驗，不孕不育組夫妻間感染解脲支原體、沙眼支原體則采用相關性分析，如P<0.05，則差異存統計學意義。

2.結果

2.1兩組患者病原體感染率比較

與健康對照組相比，不孕不育組患者解脲支原體感染、沙眼衣原體感染、解脲、沙眼衣原體同時感染、淋病奈瑟氏菌感染率明顯較高，差異有統計學意義（P<0.05）。見表1。

2.2不孕不育組夫妻間感染解脲支原體的相關性分析

不孕不育組130對夫妻中丈夫和妻子的解脲支原體感染率分別為62.3%、59.2%，其夫妻間感染解脲支原體具有相關性（r=0.864，P<0.05）。見表2。

2.3不孕不育組夫妻間感染沙眼支原體的相關性分析

不孕不育組130對夫妻中丈夫和妻子的沙眼支原體感染率分別為44.6%、39.2%，其夫妻間感染沙眼支原體具有相關性（r=0.773，P<0.05）。見表3。

3.討論

隨著人們社交頻繁及性意識的改變，由于不潔性行為引起的泌尿生殖系統感染發生率也隨著上升。且人們普遍缺乏性衛生知識，自我保護意思不強，使泌尿生殖系統感染進一步增加，因此對人類生殖健康帶來嚴重的威脅。Ruiying等調查發現，全世界約有8%-10%的育齡夫妻患不孕不育癥，其中20%～60%的不孕不育病因為泌尿生殖系統感染，而導致生殖系統炎癥的重要病原體為解脲支原體、沙眼衣原體、淋病奈瑟氏菌。

解脲支原體主要的傳播方式是性傳播，其主要是通過粘附在泌尿生殖道表皮細胞表層來對細胞產生損傷，從而導致輸卵管炎、子宮內膜炎、宮頸炎等，因此患者常常有外陰瘙癢等癥狀。近年來解脲支原體感染與不孕不育癥的相關性逐漸成為研究熱點。本研究結果顯示，與健康對照組相比，不孕不育組患者解脲支原體感染率明顯較高（P<0.05）。解脲支原體感染引起不孕的機制主要為引起子宮內膜及輸卵管的慢性炎癥。除此之外，感染誘發的自身免疫反應可能與不孕有關。解脲支原體可以同時粘附在巨噬細胞和精子表面，對精子運動產生阻擋，且其還能分泌神經氨酸酶樣物質對精子和卵細胞的結合產生干擾，使不孕的可能性增大。

作為革蘭陰性病原體，沙眼衣原體有兩種發育形式，即始體和原體，其中感染力較強的原體，其侵入的靶細胞主要是柱狀上皮細胞，因此常常累及宮頸。沙眼衣原體感染機體后主要在宮頸、尿道及精液中存活，通過性接觸、直接體液接觸等方式來傳播。沙眼衣原體引起的泌尿生殖系統感染在歐美國家已超過了淋病奈瑟氏菌，在性傳播疾病病原體中排第一位，我國雖然還是淋病奈瑟氏菌作為性傳播疾病首位致病菌，但沙眼衣原體感染率也逐年上升。本研究結果顯示，與健康對照組相比，不孕不育組患者沙眼衣原體感染率明顯較高（P<0.05），與鎖丙榮等研究結果相符。其機制可能為沙眼衣原體感染可引起生殖道炎癥及粘連，嚴重時閉塞，同時可引起生殖道黏膜細胞壞死，從而使機體免疫系統與精子直接相接觸，通過分泌精子抗體來殺死精子而導致不孕。同時，沙眼衣原體感染可降低宮頸黏液的葡萄糖含量，使進入宮頸的精子活力下降而影響受精過程。沙眼衣原體侵占男性附睪及前列腺可改變精液的生理功能而導致不育。本研究結果顯示，不孕不育夫妻間感染解脲支原體、沙眼支原體具有相關性（r=0.864，P<0.05；r=0.773，P<0.05）。因此，不孕不育癥夫妻雙方有一方感染解脲支原體或沙眼支原體都應常規讓配偶同時檢測。

作為革蘭染色陰性雙球菌，淋病奈瑟氏菌是引起不育的重要病原體。其主要是通過單個植入的方式粘附在精子細胞膜表面，使細胞膜的結構受到破壞，進而入侵到精子細胞質和細胞核內，使精子內部結構受到破壞，對精子密度、活力產生嚴重不良影響，甚至導致精子死亡而出現少精癥、無精癥。朱海燕等研究發現，其也可通過侵犯輸卵管引起炎癥、粘連和阻塞，使輸卵管上皮細胞分泌功能和纖毛擺動功能受損，而影響受精過程。

綜上所述，生殖道解脲支原體、沙眼衣原體、淋病奈瑟氏菌感染與不孕不育相關，有必要對不孕不育夫妻，特別是原因不明的不孕不育，同時檢測解脲支原體、沙眼衣原體、淋病奈瑟氏菌DNA。