P53、Ⅱ型拓撲異構酶、P-糖蛋白在食管癌組織中的表達及臨床意義

張喜鳳，梁憲斌，向 梅，張維真 (鄭州市第三人民醫院腫瘤內科，河南 鄭州 450000)

食管癌為臨床多發消化道惡性腫瘤，發病率和病死率均較高[1-2]。外科手術為臨床治療食管癌的重要措施，可有效切除病變組織，但針對臨床分期較晚、發生肌層浸潤及淋巴結轉移的患者，經手術治療后難以取得滿意效果，且復發風險較高[3-4]。因此，如何對食管癌予以早期明確診斷成為研究熱點。隨分子生物技術不斷發展，腫瘤相關基因于惡性腫瘤中的研究已成臨床焦點，檢測相關癌基因及抑癌基因表達和其表達情況對食管癌患者的影響，對早期診斷食管癌、評估預后極為重要[5-6]。p53屬抑癌基因類型，臨床多項研究均已證實其在惡性腫瘤疾病發生、進展中具有重要作用，且可對其生物學行為直接產生影響[7-8]。Ⅱ型拓撲異構酶(topoisomerase type Ⅱ，TOPOⅡ)為調節DNA構象動態改變的重要核酶，為腫瘤細胞增殖的特異性標志物；P-糖蛋白(P-glycoprotein，PGP)是多藥耐藥基因所編碼的跨膜糖蛋白類型，其表達水平增高通常表明病灶對相應化療藥物存在耐藥性，同時提示預后效果不佳[9-10]。本研究選取鄭州市第三人民醫院收治的213例食管癌患者，探討其p53、TOPOⅡ、PGP表達情況。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取鄭州市第三人民醫院2018年12月至2020年9月收治的213例食管癌患者設為研究組、21例食管良性腫瘤患者設為對照組。研究組：男143例，女70例；年齡39～76(57.13±5.65)歲；臨床分期：Ⅰ+Ⅱ期114例，Ⅲ+Ⅳ期99例；肌層浸潤情況：<1/2肌層浸潤85例，≥1/2肌層浸潤128例；低分化106例，中分化64例，高分化43例；淋巴結轉移116例，淋巴結無轉移97例。對照組：男13例，女8例；年齡36～73(56.87±5.08)歲；疾病類型：息肉瘤3例，食管血管瘤2例，乳頭狀瘤6例，食管平滑肌瘤10例。2組基本臨床資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 選取標準食管癌納入標準：1)經病理檢查確診；2)Ⅰ～Ⅳ期；3)知情同意本研究；4)采取手術治療。排除標準：1)合并腎肝功能重度障礙；2)合并血液系統病變；3)合并全身性重度感染性疾??；4)合并其他腫瘤；5)存在認知功能障礙或神經系統病變，無法順利配合完成本研究。

1.3 方法2組均采取手術治療，術中取病變組織制成石蠟切片，然后常規進行免疫組化染色。依據p53、TOPOⅡ、PGP陽性數目占比評估，占比≤10%、11%～50%、51%～75%、>75%分別計1～4分；依據染色強度，無色、淡黃、棕黃、黑色、褐色分別計0～3分，兩項相乘不足3分為陰性(-)，3～5分呈弱陽性(+)，6～9分呈中陽性(++)，9分以上呈強陽性(+++)。

1.4 觀察指標比較觀察2組p53、TOPOⅡ、PGP陽性表達情況。統計分析研究組不同淋巴結轉移情況、不同臨床分期、不同肌層浸潤情況、不同分化程度患者p53、TOPOⅡ、PGP陽性表達情況。

1.5 統計學處理采用SPSS 25.0對數據進行分析，計數資料用百分數表示，比較用χ2檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 2組p53、TOPOⅡ、PGP陽性表達情況比較研究組p53(57.28%)、TOPOⅡ(78.40%)、PGP(60.56%)陽性表達率高于對照組(4.76%、9.52%、4.76%)，差異均有統計學意義(χ2=21.142，P<0.001；χ2=45.206，P<0.001；χ2=24.106，P<0.001)。見表1。

表1 2組p53、TOPOⅡ、PGP陽性表達情況比較 n(%)

2.2 有無淋巴結轉移患者p53、TOPOⅡ、PGP陽性表達情況比較有淋巴結轉移者p53(75.00%)、TOPOⅡ(89.66%)、PGP(80.17%)陽性表達率高于無淋巴結轉移者(36.08%、64.95%、37.11%)，差異均有統計學意義(χ2=32.696，P<0.001；χ2=19.044，P<0.001；χ2=41.008，P<0.001)。見表2。

表2 有無淋巴結轉移患者p53、TOPOⅡ、PGP陽性表達情況比較 n(%)

2.3 不同臨床分期患者p53、TOPOⅡ、PGP陽性表達情況比較Ⅲ+Ⅳ期食管癌患者p53(80.81%)、TOPOⅡ(95.96%)、PGP(84.85%)陽性表達率均高于Ⅰ+Ⅱ期患者(36.84%、63.16%、39.47%)，差異均有統計學意義(χ2=41.855，P<0.001；χ2=33.670，P<0.001；χ2=45.675，P<0.001)。見表3。

表3 不同臨床分期患者p53、TOPOⅡ、PGP陽性表達情況比較 n(%)

2.4 不同肌層浸潤情況患者p53、TOPOⅡ、PGP陽性表達情況比較≥1/2肌層浸潤者p53(72.66%)、TOPOⅡ(95.31%)、PGP(75.00%)陽性表達率高于<1/2肌層浸潤患者(34.12%、52.94%、38.82%)，差異均有統計學意義(χ2=31.003，P<0.001；χ2=54.160，P<0.001；χ2=27.989，P<0.001)。見表4。

表4 不同肌層浸潤情況患者p53、TOPOⅡ、PGP陽性表達情況比較 n(%)

2.5 不同分化程度患者p53、TOPOⅡ、PGP陽性表達情況比較不同分化程度食管癌患者p53、TOPOⅡ、PGP陽性表達情況比較差異均無統計學意義(χ2=1.452，P=0.484；χ2=3.659，P=0.161；χ2=3.877，P=0.144)。見表5。

表5 不同分化程度患者p53、TOPOⅡ、PGP陽性表達情況比較 n(%)

3 討論

惡性腫瘤發病、進展及演變為多步驟、多因素參與的一個復雜生物學過程，且與原癌基因活化和抑癌基因喪失活性具有密切相關性[11-13]。研究[14-15]指出，p53抑癌基因的突變或丟失致使其表達產物p53蛋白功能發生異常，促使食管癌發生、進展，故明確其機制極為重要。本研究結果顯示，研究組p53陽性表達率高于對照組，且在不同淋巴結轉移、肌層浸潤及臨床分期患者中存在顯著差異。野生型p53通過調節細胞周期、促使細胞分化及細胞凋亡，維持細胞遺傳穩定性，但突變型p53則會喪失上述生物學功能，并造成細胞突變，增加腫瘤形成風險。同時，相關研究[16-17]表明，野生型p53半衰期較短，而突變型p53半衰期較長，且具有較高穩定性，因此臨床可通過免疫組化等方式檢測出突變型p53，并準確判斷p53基因異常。另有研究[18]發現，食管癌組織內p53呈異常高表達狀態，但正常食管組織內p53則無表達或呈低表達，提示p53基因突變后編碼出不具備功能的p53，其喪失促使細胞分化及凋亡、調控細胞周期的功能，無法抑制癌變細胞轉化，致使癌變細胞較早發生轉移、浸潤程度較高等。

近年來，臨床對腫瘤多耐藥基因研究不斷深入，對腫瘤耐藥性認知取得進展，其中PGP屬多耐藥性蛋白產物，其陽性表達情況和細胞耐藥程度高度相關[19-20]。PGP屬轉運蛋白ATP結合家族，其主要分布于具備多耐藥細胞膜上，部分表達于細胞質內。研究[21]表明，PGP是一個跨膜藥泵蛋白，其分子內不僅存在和藥物結合的多個位點，且還有結合于ATP的位點，能結合于多種藥物，并通過分解ATP提供能量形式把擴散至細胞的阿霉素、生物堿類及長春新堿等親脂類藥物泵出細胞外，以此降低細胞中藥物濃度，造成細胞耐藥。同時，腫瘤細胞對化療藥物耐藥性，部分是一開始即對其產生耐藥，其余則是于化療后誘導產生，但兩者均具備相同生物學基礎，即PGP所介導耐藥[22-23]。此外，PGP還可間接或直接參與細胞分子代謝及增殖、分化等調控，抵抗caspase依賴性凋亡，于細胞凋亡中發揮重要調節作用。而DNA拓撲異構酶為催化DNA拓撲異構改變的一種酶系，可分為TOPOⅠ及TOPOⅡ，其中TOPOⅡ基因發生點突變后可改變其特異性氨基酸序列，造成TOPOⅡ發生質與量變化，對TOPOⅡ核藥物、DNA間結合造成直接影響，并抑制DNA裂解，最終引起耐藥[24]。研究[25]指出，以TOPOⅡ作靶點的藥物主要包括鬼臼霉素類及蒽環類抗生素，如玫瑰樹堿、VP16、多柔比星及新霉素等，TOPOⅡ所介導耐藥和細胞中藥物靶酶活性變化及DNA修復具有相關性，而化療是否敏感與TOPOⅡ表達情況相關，若TOPOⅡ表達異常，則會造成腫瘤對抗腫瘤藥物發生耐藥。

本研究還發現，研究組TOPOⅡ、PGP陽性表達率也高于對照組，并隨臨床分期、肌層浸潤等變化而變化，故結合上述研究認為，食管癌患者p53、TOPOⅡ、PGP陽性表達情況發生異常，且其表達異常與食管癌病灶侵襲、淋巴結轉移關系密切，臨床可根據p53、TOPOⅡ、PGP陽性表達情況分析食管癌臨床分期、肌層浸潤等情況，還可參照上述指標表達水平判斷疾病耐藥性，并依據評估結果調節用藥方案，保證治療有效性、安全性。

綜上所述，食管癌患者p53、TOPOⅡ、PGP陽性表達情況異常增高，且隨淋巴結轉移、肌層浸潤及臨床分期增高，其陽性表達率越高，臨床可通過測定p53、TOPOⅡ、PGP陽性表達情況評估食管癌病情程度、耐藥性，為臨床制定、調整治療方案提供一定參考依據。