B（A）血型的血清學特點及基因分析-附1例報告

何子毅 胡應明 崔四平 許先國

ABO血型鑒定的準確性是輸血安全的重要保障。在臨床工作中經常會遇到一些ABO血型鑒定正反定型不一致的情況，常導致臨床輸血延遲，也給輸血科完成血型鑒定及交叉配血帶來不少的麻煩。本實驗室在日常送檢的血樣本中發現了1例B（A）血型，但該血型用血清學鑒定常被誤定為A2B型或A亞B型；該類血型罕見，在高加索人群大約為1/580 000～1/170 000[1]，我國還沒有非常準確的數據報道。本次發現的ABO*BA.02/O.01.02型尚未見在國外有報道，但在國內有極少的個案報道[2-3]。我們對本例血樣本進行了血型血清學和基因測序，報道如下。

對象與方法

1對象 患者，女，45歲，籍貫四川省富順縣。2021年4月21日，因“膽囊結石”入我市某醫院外科行膽囊取石術，醫院檢驗科因ABO血型正反定型不一致，最終不能確定ABO血型而送檢至本實驗室。

2試劑與儀器 單克隆抗-A1、單克隆抗-H試劑、紅細胞不規則抗體篩選細胞、紅細胞不規則抗體鑒定譜細胞均為上海血液生物醫藥有限責任公司產品；單克隆抗-A、抗-B、抗-AB為長春博迅生物技術有限公司產品；微柱凝膠卡為西班牙Daina公司產品，聚凝胺試劑盒為上海血液生物醫藥有限責任公司產品，人ABO血型反定型試劑紅細胞為本實驗室自制（通常為5～6人份紅細胞混合），核酸提取試劑盒由芮寶生醫藥股份有限公司提供。主要儀器：KA-2200型血型血清學專用離心機（日本KUBOTA公司）、微柱凝膠卡專用離心機和孵育器（西班牙Daina公司），Magcore HF48型核酸提取儀（芮寶生醫藥股份有限公司），PCR擴增儀（美國ABI公司），3730基因測序儀（美國ABI公司）及其機帶測序軟件Seqscap V2.5。

3血型血清學方法 試管法進行ABO血型鑒定、紅細胞不規則抗體篩選和不規則抗體鑒定，聚凝胺法及微柱凝膠法進行IgG型抗體鑒定。試驗方法按照《全國臨床檢驗操作規程》（第4版）執行。微柱凝膠法操作按產品使用說明書進行，其他試驗均執行本實驗室的標準操作規程。

4基因組DNA抽提 采用自動核酸提取儀抽提，嚴格按照試劑說明書進行操作，標本DNA濃度為50 ng/μL，A260/280比值為1.80。

5ABO血型基因分型 ABO全部外顯子編碼區序列分析操作參照文獻[4]：采用3對特異性引物分別擴增ABO等位基因的第6，7外顯子序列。擴增產物進行酶切純化后，采用Big Dye Terminator v3.1 cycle sequencing試劑進行測序。測序電泳在ABI3730DNA測序儀上進行，測序結果用SeqScape V2.5軟件進行序列分析（參考序列為GenBank中ABO基因序列，登記號為NG_006669.1），最終依據堿基情況判定標本基因型。ABO等位基因命名原則參照國際輸血協會紅細胞免疫遺傳和血型命名委員會的標準。

結果

1血型血清學結果 患者ABO血型鑒定：正定型為AB型，A抗原凝集強度“2+”，明顯弱于正常A抗原，與單克隆抗-A1未凝集，提示為A2亞型或其他亞型；紅細胞與單克隆抗-B和單克隆抗-H凝集強度均“4+”；血漿與試劑紅細胞Ac、Oc有弱凝集，與Bc細胞無凝集，4℃條件下與常溫下相比較各反應管沒有明顯的增強?；颊呒t細胞不規則抗體篩選在鹽水介質呈陽性，進一步用鹽水介質法進行抗體特異性鑒定，檢出抗-M，經聚凝胺法和微柱凝膠法進行不規則抗體篩選未發現存在IgG型紅細胞不規則抗體。選用M抗原陰性的Ac和Oc進行反定型試驗，結果與M抗原（-）的Ac仍有“1+”凝集反應，與M抗原（-）的Oc無凝集，說明患者血漿中存在抗-A1，結果見表1。

表1 血型血清學鑒定結果

2ABO基因檢測結果 對ABO基因的第6和第7外顯子直接測序發現，存在c.261delG、c.297A＞G、c.526C＞G、c.646T＞A、c.657C/T、c.681G＞A、c.700C＞G、703G＞A、c.771C＞T、c.796C＞A、c.803G＞C、c.829G＞A、c.930G＞A，與ABO*A1.01標準序列對比，發現存在突變基因c.700C＞G（圖1），確定該獻血者為B（A）/O 02雜合，基因型為ABO*BA.02/O.01.02。

圖1 ABO基因第6第7外顯子測序部分圖（其中c.700C＞G是國內罕見報道）

討論

上海血液中心于2004年在國內首次報道了B（A）血型[2]。在國外，YAMAMOTO等最早發現并報道了B（A）血型[5]。B（A）血型在血清學和遺傳學分類上歸屬于B型，且是罕見的B亞型。已報道在歐洲高加索人群中B（A）血型的頻率約為1/（17～58）萬[1]，我國獻血人群B（A）血型頻率大約為1/（5～10）萬[6]，上海血液中心曾報道B（A）02的發生頻率為0.78/10萬[7]。已報道的B（A）分型共有6種，為B（A）01～06。國內鮮見報道的B（A）型分型為B（A）02（c.700C＞G）、B（A）04（c.640A＞G）以及B（A）05（c.641T＞C）［2-3，8］。B（A）04和B（A）02血型是我國大陸B（A）血型報道的主要類型。

血型血清學方法在ABO血型鑒定存在局限性，有些血型的變異型可能會被誤判，造成血型血清學與分子生物學定型結果不一致，也存在技術操作者對血型血清學中強弱凝集程度判斷標準認知有差異。B（A）血型常因紅細胞上檢出A抗原，在血型血清學定型為A亞B型。實際上B（A）血型與A亞B型在血清學特點上有一定區別：B（A）型正定型與單克隆抗-A1不凝集，與一些單克隆抗-A及人源性抗-A發生弱凝集，與抗-B強凝集（4+），與抗-H多數情況下發生強凝集，反定型血清中含有正常的抗-A、與A1細胞發生凝集，也可以凝集A2細胞；而A亞B血型正定型與單克隆抗-A呈較強凝集，與抗-H呈弱凝集，反定型血清中可能檢出不規則抗-A1、與A1細胞呈弱凝集反應。ABO亞型主要是由于控制糖基轉移酶表達的ABH基因第6和/或第7外顯子基因位點發生了變異，分子基礎與4個氨基酸的關鍵位置（G526C、A703G、A796C、C803G）密切相關，通常將A糖基轉移酶描述為AAAA，B糖基轉移酶為BBBB，那么B（A）的糖基轉移酶可能是BABB或BBBB[9-11]。B（A）血型的形成機理是B等位基因在正常B基因序列上發生單堿基變異，變異后的B基因可能具有編碼A糖基轉移酶和B糖基轉移酶雙功能活性，從而在血清學方法中既表現B抗原特異性，又表現少量A抗原特異性[12]。

本例血樣本經ABO血型鑒定后發現弱A抗原表達，且與抗-A1不反應，而B抗原和H抗原有強凝集反應，反定型存在抗-A1，初步推測為A2B型或A亞B，由于存在強凝集的H抗原，也可能為B（A）血型。由于該患者為外地務工人員，無法開展家系調查，基因測序分析后發現該血樣本的B等位基因在第700位核苷酸發生了C＞G的單堿基突變，可能導致第234位氨基酸由Pro（脯氨酸）到Ala（丙氨酸）的改變，導致266位甲硫氨酸和268位丙氨酸的空間構象發生變化，使糖基轉移酶特性發生改變[13-14]，從而具有了編碼雙功能酶活性的能力。因此，B（A）02又稱為B（A）700（526C/G，c.700C＞G，703G/A，796C/A，803G/C，BBBB）。

B（A）血型患者若進行輸血治療時，應根據病情選擇O型洗滌紅細胞或AB型血漿。若獻血者或患者為B（A）血型，條件允許的情況下應進行家系調查，并進行分子生物學分析，結合血型血清學準確鑒定血型，進一步保障輸血安全。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突