光枝勾兒茶內生真菌多樣性及抑菌活性研究

周思旋 張濤 劉暢 唐遠江 盧昱希 楊粵黔 余波 史開志

摘 要：? 為探索貴州苗藥光枝勾兒茶內生真菌類群特征、分布部位及其抑菌活性，該研究采用傳統方法對貴州省貴陽市和黔西市光枝勾兒茶內生真菌進行分離，并基于分子生物學及統計學對其分類地位進行鑒定及多樣性評價，最后通過微量肉湯倍比稀釋法篩選具有抑菌活性的菌株。結果表明：（1）從光枝勾兒茶中分離到191 株內生真菌，隸屬于3 個門5 個綱10 個目15 個科19 個屬，優勢屬為葉點霉屬（Phyllosticta）、間座殼屬（Diaporthe）、葡萄座腔菌屬（Botryosphaeria）和刺盤孢屬（Colletotrichum）。（2）黔西光枝勾兒茶內生真菌香農-維納多樣性指數（H′Q=2.112）較貴陽（H′G=1.801）高，索倫森相似性指數CsG-Q為0.923，不同組織香農-維納多樣性指數為莖（H′S=2.004）>根（H′R=1.764）>葉（H′L=1.654）>果實（H′F=1.473），莖和葉內生真菌的索倫森相似性最高（CsS-L=0.667）。（3）篩選出的21株內生真菌對供試菌大腸桿菌（Escherichia coli）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）和沙門氏菌（Salmonella enterica）具有抑菌效果，其中Diaporthe sp. QX4G6對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和沙門氏菌的最小抑菌濃度分別為12.5、6.25、12.5 mg·mL-1，最小殺菌濃度分別為12.5、6.25、12.5 mg·mL-1。以上研究結果揭示了光枝勾兒茶蘊藏豐富的內生真菌資源，不同地區及組織內生真菌類群組成有差異，多個分離菌株具有抗菌活性，為光枝勾兒茶內生真菌天然抗菌藥物或藥源研發奠定了基礎。

關鍵詞： 光枝勾兒茶， 內生真菌， 多樣性， 候選菌株， 抑菌活性

中圖分類號：? Q939

文獻標識碼：? A

文章編號：? 1000-3142（2023）07-1236-08

收稿日期：? 2022-07-20

基金項目：? 國家自然科學基金（31960716）； 黔農科院國基后補助（〔2021〕49號）。

第一作者： 周思旋（1984-），博士，副研究員，主要從事藥用植物微生物資源分類及代謝產物研究，（E-mail）kerrybaiye@163.com。

通信作者：? 史開志，研究員，主要從事獸藥資源開發與產業化研究，（E-mail）shkzjjp@163.com。

Diversity and antibacterial activity of endophytic fungi

from Miao medicine Berchemia polyphylla var. leioclada

ZHOU Sixuan1， ZHANG Tao1， LIU Chang2， TANG Yuanjiang1，

LU Yuxi1， YANG Yueqian1， YU Bo1， SHI Kaizhi1*

（ 1. Institute of Animal Husbandry and Veterinary， Guizhou Academy of Agricultural Sciences， Guiyang 550005， China; 2. Research Center for

Application and Development of Medicine and Food Dual-Use Resources， School of Pharmacy，

Guizhou University of Traditional Chinese Medicine， Guiyang? 550025， China ）

Abstract：? To explore the fungal taxa， distribution and antibacterial activity of Berchemia polyphylla var. leioclada， endophytic fungi of B. polyphylla var. leioclada from Guiyang and Qianxi of Guizhou Province were isolated by tissue fragment separation. Based on the methods of molecular biology and statistics， the endophytic fungi were identificated and their diversity were analyzed. The strains with antibacterial activity were screened by microdilution of broth. The results were as follows： （1） A total of? 191 fungal strains were isolated， which were classified into 3 phyla， 5 classes， 10 orders， 15 families and 19 genera. Among all strains， Phyllosticta， Diaporthe， Botryosphaeria and Colletotrichum were the dominant genera. （2） The endophytes fungal? Shannon-Weiner diversity index of Berchemia polyphylla var. leioclada in Qianxi （H′Q=2.112） was higher than that in Guiyang （H′G=1.801）， and the Sorensons similarity coefficient （CsG-Q） was 0.923. The Shannon-Weiner diversity index of different tissues was stem （H′S =2.004）> root（H′R=1.764）> leaf（H′L=1.654）>fruit（H′F=1.473）. The similarity index between stem and leaf was the highest，? which was CsS-L =0.667. （3） 21 endophytic fungi secondary metabolites had inhibitory effects on Escherichia coli， Staphylococcus aureus and Salmonella enterica. The isolate Diaporthe sp. QX4G6 fermentation broth extract have relatively high inhibitory effects， in which the minimum inhibitory concentrations against Escherichia coli， Staphylococcus aureus and Salmonella enterica were 12.5， 6.25 and 12.5 mg·mL-1， and the minimum bactericidal concentrations were 12.5， 6.25 and 12.5 mg·mL-1， respectively. The study reveal rich endophytic fungus resources of Berchemia polyphylla var. leioclada and most of fungi have good antibacterial activity， which lay the foundation for the researchs and development of natural antibacterial drugs or drug sources for endophytic fungi from B. polyphylla var. leioclada.

Key words： Berchemia polyphylla var. leioclada， endophytic fungi， diversity， candidate strains， antibacterial activity

植物內生真菌是指生活在植物細胞中或在其生活史某一時期生活在植物組織內，對植物組織沒有引起明顯病害的一類真菌（Petrini， 1991）。幾乎所有植物都含內生真菌，分布于植物的根、莖、葉、花、果實等各個部位，種類和數量繁多，每一種植物都是內生真菌潛在的資源寶庫（Zhou & Hyde， 2001）。隨著內生真菌研究不斷深入，不同植物的內生真菌組成不同，寄主植物的種類、部位、環境和地理區域均是決定內生真菌種群結構的重要因素，目前從植物中分離出來的內生真菌種類繁多，涉及子囊菌、擔子菌、接合菌、無孢菌等多種類群（譙利軍等，2018；Bhattacharya et al.， 2019；胡永志等，2021）。內生真菌與宿主植物長期協同進化，互惠共生，處于一種動態平衡的拮抗關系，有助于提高宿主對脅迫環境的適應性和抗性，在植物生長發育和繁殖中起到了重要作用（隋麗等，2021）。有研究表明，從植物中分離到的內生真菌能產生豐富的次級代謝產物，包括生物堿、苯駢吡喃酮、黃酮、酚酸等多種類型化合物，對細菌、真菌、病毒等具有不同程度的拮抗作用，在藥物研發、病害防治等方面表現出顯著的經濟價值和應用前景，是天然活性物質的重要來源（郭順星，2018；Hanani et al.， 2022）。內生真菌的存在及其發揮出來的優越性為尋找結構新穎、活性獨特、替代藥用植物的新藥研發指明了方向。

光枝勾兒茶（Berchemia polyphylla var. leioclada）為鼠李科勾兒茶屬植物，是貴州苗族習用藥材，味苦、平，含苷類、醌類、木脂素類、萜類以及黃酮類等多種化學成分，具有抗氧化、抗腫瘤、抗腹瀉、抗炎、鎮痛、抑菌等活性，對治療支氣管炎、痢疾、關節炎等具有良好的效果，作為民族藥物，可用于治療人、畜腸炎及消化不良性腹瀉（梁應林等，2013；唐遠江等，2018）。目前已從該屬植物中分離到19個已知化合物和4個蒽醌-苯并異色滿苯醌二聚體，部分化合物顯示了較好的對乙酰膽堿酯酶活性，體現了明顯的研究價值（景永帥等，2011）。然而，光枝勾兒茶生長周期長，產量低，易受環境地域等因素影響，傳統植物開發應用受到了限制，其內生真菌作為植物的共生體和一種潛在的新資源，在寄主植物提供的營養和保護下，經長期共同進化，可增強寄主植物的競爭能力和對食草動物、病原體和各種非生物脅迫的抵抗力，這種復雜多變的生境使內生真菌在生物制藥、農業生產和工業發酵等方面表現出廣闊的應用前景，是尋找結構新穎、活性獨特物質和替代植物的重要來源（元超等，2021）。同時，內生真菌的開發應用可能實現大規模、低成本和無污染的工業化生產，為解決藥用植物資源和環境保護提供了新途徑。本研究基于光枝勾兒茶的藥用價值及植物應用瓶頸，解析其內生真菌組成情況，設想能夠通過篩選植物內生真菌抑菌活性，得到具有與植物產生功能相同或相似的次級代謝產物的微生物資源，從而部分替代植物來源生產臨床天然藥物。以貴州貴陽、黔西多年生光枝勾兒茶為研究對象，系統分離并鑒定根、莖、葉和果實等多個部位的內生真菌，在獲得可培養真菌資源的基礎上，采用分子生物學鑒定真菌類群，并通過統計學方法對其進行多樣性評價分析，以大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和沙門氏菌為指示菌，篩選具有抑制革蘭氏陰性、陽性兩類細菌活性的內生真菌類群，為研發新型天然抑菌藥物提供候選菌株，也為光枝勾兒茶進一步開發應用奠定研究基礎。

1 材料與方法

1.1 植物材料

分別采集貴州省貴陽市龍洞堡（106°47′26″ E，26°31′49″ N，海拔1 100 m），黔西市（105°49′04″ E，27°04′00″ N，海拔1 330 m）健康光枝勾兒茶樣本11 株，其中貴陽6 株、黔西5 株，將采集的光枝勾兒茶植株放入采樣袋帶回實驗室，24 h內進行內生真菌分離培養。植株經中山大學植物學廖文波教授鑒定為鼠李科植物光枝勾兒茶（Berchemia polyphylla var. leioclada）。

1.2 測試菌株

大腸桿菌（Escherichia coli ATCC 25922）標準株、沙門氏菌（Salmonella enterica ATCC 13076）標準株、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus ATCC 6538）標準株購自中國微生物菌種保藏中心。

1.3 內生真菌的分離純化

將采集到的光枝勾兒茶樣本沖洗干凈并自然晾干，用無菌去離子水反復沖洗，無菌濾紙吸干水分，置于0.1%吐溫80溶液中浸泡活化3～5 min，無菌水沖洗，無菌濾紙將水分吸干后于75%乙醇中浸泡3 min，無菌水沖洗，用無菌濾紙吸干表面水分。采用70%乙醇+3% H2O2混合液消毒，無菌水沖洗3 次，無菌濾紙吸干，將葉、根、莖和果實剪成小組織塊（0.5 cm × 0.5 cm），接種于含氯霉素（終濃度為20 μg·mL-1）的PDA平板內，28 ℃恒溫培養。為驗證表面消毒是否有效，將表面消毒組織接種于含氯霉素PDA培養基上印記，同等條件下恒溫培養，印記部位未見真菌生長則確認消毒徹底（Sanchez-Marouez et al.， 2007）。隨時觀察，組織塊邊緣有菌絲長出時，采用針尖端菌絲挑取法，將菌絲轉接于新的PDA平板，直至純化獲得形態均一菌落進行鑒定及保存。分離過程中詳細記錄組織塊及分離菌株數量。

1.4 內生真菌的鑒定

純化后的菌株參照《真菌學鑒定手冊》（魏景超，1979），從形態學上初步判定菌株分類學地位。采用引物ITS1/ITS4（White et al.，1990）對ITS基因序列進行擴增及測序。測序成功的ITS序列通過BioEdit分析軟件校對、拼接、剪切，將剪切后的序列逐一通過GenBank數據庫的Blast進行在線比對鑒定（Zhou et al.， 2013），根據序列的相似度和覆蓋率，結合菌株形態學特征確定各分離菌株歸屬，并根據MycoBank（http：//www.mycobank.org/ quicksearch.aspx）官網查詢確認最新的內生真菌分類地位。

1.5 數據統計及多樣性分析

通過數據統計，根據多樣性評價指標，采用分離率（isolation rate， IR）、分離頻率（isolation frequency， IF）、卡馬戈指數（Camargos index）、香農-維納多樣性指數（Shannon-Weiner diversity index， H′）、辛普森指數（Simpsons index， D）及索倫森相似性指數（Sorensons similarity coefficient， Cs）分析光枝勾兒茶植物內生真菌的多樣性。

1.6 內生真菌體外抗菌活性篩選

1.6.1 菌株的選擇及發酵產物制備 根據鑒定結果，選擇分布于不同屬的23株分離菌，分別為QX4G6、QX3Y2-5、QX5Y4-3、QX3J3-3、QX1Y1-1、QX3Y3-1、QX3J3-5、QX1G1-3、QX5G2-1、QX3J4-1、G2S12、G2S20、G2L17、D2S31、G3F4、D2S10、D2S25、D2S24、D3F3、G2S1、G2S11、D1S16和G3L5，采用PDA活化，待菌絲長滿平板后，切成小塊，接種于PDB培養基，于28 ℃，120 r·min-1振蕩培養7 d后，靜置培養30 d，發酵培養物用等體積乙酸乙酯萃取3 次，合并萃取液，經旋蒸、干燥后，加入MH培養基稀釋至濃度為200 mg·mL-1的母液備用。

1.6.2 菌液制備 將大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌接種于MH固體培養基上劃線活化，置于37 ℃培養18 h，挑取單個菌落于含MH液體培養基的試管中，置于37 ℃、120 r·min-1條件下振蕩培養12 h。用MH液體培養基調整菌液OD600為0.8后稀釋1 000 倍，使菌液濃度為105～106 CFU·mL-1，備用。

1.6.3 最小抑菌濃度（minimum inhibitory concentration， MIC）的測定 參考Balouiri等（2016）的方法，采用微量肉湯二倍稀釋法，于無菌96 孔板每孔中各加入100 μL肉湯培養基，分別向第1 孔中加入100 μL配備好的藥液，混勻后依次倍比稀釋，直到第9 孔混勻后棄去100 μL混合液。每孔加入上述配備好的100 μL細菌溶液。每板設置無藥和空白對照組，觀察細菌生長情況，37 ℃恒溫培養18 h后取出，每個濃度做3 次重復。

采用TTC（2，3，5－氯化三苯基四氮唑）法判定MIC結果。向上述培養18 h后的96 孔板每孔分別加入20 μL 0.5%的TTC，37 ℃避光培養1 h，觀察菌液變化情況。試驗樣本溶液澄清、顏色未發生變化的最后1 孔藥物濃度為該藥的MIC。

1.6.4 最小殺菌濃度（minimum bactericidal concentration， MBC）的測定 將1.6.3試驗組澄清的各孔中液體取100 μL涂布于MH固體培養基上，37 ℃培養18～24 h觀察結果。肉眼觀察無菌落生長的最低藥物濃度為其MBC。

2 結果與分析

2.1 光枝勾兒茶內生真菌組成

從貴陽及黔西光枝勾兒茶不同組織部位780個組織塊中分離得到191 株內生真菌，分離率為24.49%（191/780），其中貴陽分離率為24.30%（132/465），黔西為24.76%（93/315）。PCR產物序列經校對、拼接、剪切后，結合形態學和分子生物學對分離得到的內生真菌進行鑒定（表1）。結果顯示，分離菌株隸屬于3 個門5 個綱10 個目15 個科19 個屬。在貴陽和黔西分別分離得到11個、14 個屬的菌株。其中，僅貴陽分離得到菌株隸屬于5 個屬，分別為煙管菌屬（Bjerkandera）、假囊酵母屬（Eremothecium）、毛色二孢屬（Lasiodiplodia）、歪嘴座殼屬（Pleurostoma）和匍柄霉屬（Stemphylium）；僅黔西分離得到8 個屬，分別為環紋碳團菌屬（Annulohypoxylon）、鐮刀菌屬（Fusarium）、微結節霉屬（Microdochium）、毛霉屬（Mucor）、新擬盤多毛孢屬（Neopestalotiopsis）、擬盾殼霉屬（Paraconiothyrium）、擬盤多毛孢屬（Pestalotiopsis）和木霉屬（Trichoderma）；貴陽和黔西共有屬6 個，分別為鏈格孢屬（Alternaria）、葡萄座腔菌屬（Botryosphaeria）、刺盤孢屬（Colletotrichum）、間座殼屬（Diaporthe）、新殼梭孢屬（Neofusicoccum）、葉點霉屬（Phyllosticta）。其多樣性分析結果表明，貴陽和黔西香農-維納多樣性指數結果為黔西（H′Q=2.112）>貴陽（H′G=1.801），辛普森指數結果為黔西（DQ=0.840）>貴陽（DG=0.774），索倫森相似性指數CsG-Q=0.923。

2.2 光枝勾兒茶內生真菌優勢屬的分離頻率 （IF）和分離率（IR）

試驗分離所得菌株優勢屬依次為葉點霉屬、間座殼屬、葡萄座腔菌屬和刺盤孢屬，分離率（IR）分別為5.90%（46/780）、4.87%（38/780）、4.10%（32/780）和3.59%（28/780），分離頻率（IF）分別為24.08%（46/191）、19.89%（38/191）、16.75%（32/191）和14.66%（28/191）。從貴陽分離得到的優勢屬葉點霉屬IR和IF最高，分別為9.46%（44/465）和39.94%（44/113），其次為間座殼屬，IR和IF分別為4.52%（21/465）和18.58%（21/113），葡萄座腔菌屬IR和IF分別為4.09%（19/465）和16.81%（19/113）。從黔西分離得到的優勢屬為刺盤孢屬，IR和IF最高，分別為6.35%（20/315）和25.64%（20/78），其次為間座殼屬，IR和IF分別為5.40%（17/315）和21.79%（17/78），葡萄座腔菌屬的IR和IF分別為4.13%（13/315）和16.67%（13/78）。

2.3 不同組織部位內生真菌多樣性分析

從光枝勾兒茶不同組織分離內生真菌分析結果表明（表2），根、莖、葉和果實分離菌分別分布于9個、13個、11個、6個屬，4個組織均分離到共有屬葡萄座腔菌屬、刺盤孢屬和間座殼屬。新殼梭孢屬為根、莖、葉共有屬，鏈格孢屬和歪嘴座殼屬為莖、葉、果實共有屬，毛色二孢屬和葉點霉屬為莖和葉共有屬，鐮刀菌屬、新擬盤多毛孢屬和擬盤多毛孢屬為根和莖共有屬。僅從根中分離得到2 個屬，分別為毛霉屬和木霉屬；僅從莖中分離到2 個屬，包括匍柄霉屬和微結節霉屬；僅從葉中分離到3 個屬，包括擬盾殼霉屬、環紋碳團菌屬和煙管菌屬；僅從果實中分離到1個屬為假囊酵母屬。

光枝勾兒茶不同組織香農-維納多樣性指數結果分析表明，莖（H′S=2.004）>根（H′R=1.764）>葉（H′L=1.654）>果實（H′F=1.473），辛普森指數結果為莖（DS=0.826）>果實（DF=0.813）>根（DR=0.765）>葉（DL=0.721）。莖和葉所得內生真菌的相似性最高，CsS-L=0.667，其次為根和莖，CsR-S=0.636，相似性最低的為根和果實，CsR-F=0.267（表3）。

2.4 內生真菌次級代謝產物抑菌活性篩選

選擇的23 株菌株次級代謝產物抑菌活性測定結果表明，其中20 株內生真菌液體發酵提取物對3 株細菌均表現出一定的抑菌作用，MIC介于6.25～100 mg·mL-1之間，1株內生真菌QX3J4-1僅對大腸桿菌有抑菌作用，2 株菌株液體發酵提取物對供試菌株未見明顯抑菌效果。菌株QX4G6、G3F4和D2G24對大腸桿菌抑菌效果較好，MIC均為12.5 mg·mL-1；QX4G6、G2S12和G3F4對金黃色葡萄球菌抑菌效果較好，MIC均為6.25 mg·mL-1；菌株QX4G6、QX1Y1-1、G3F4、D2G24和G2S1對沙門氏菌抑菌效果較好，MIC均為12.5 mg·mL-1（表4）。

20株內生真菌液體發酵提取物對3 株供試細菌的MBC介于6.25～100 mg·mL-1之間，1 株內生真菌QX3J4-1僅對大腸桿菌有殺菌作用，2 株菌株液體發酵提取物對大腸桿菌、 金黃色葡萄球菌及沙門氏菌無殺菌作用。其中，菌株QX4G6對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌殺菌效果最好，MBC分別為12.5、6.25、12.5 mg·mL-1，其余菌株液體發酵提取物MBC大于或等于25 mg·mL-1（表4）。

3 討論與結論

目前內生真菌以組織塊分離法為主，一方面獲得可培養內生真菌類群，另一方面為后續內生真菌的開發利用提供資源。本研究以生境不同的貴州貴陽和黔西光枝勾兒茶為研究對象，從780 個植物組織塊中共分離到191 株可培養內生真菌，其中子囊菌為190 株，占絕對優勢，僅鑒定到1 株擔子菌。目前報道的植物內生真菌類群文獻，大多以子囊菌為主，這可能與植物內部環境有關，也可能是受分離方法或者物種差異所限（Gaur et al.， 2021）。屬水平上，葡萄座腔菌屬、刺盤孢屬、間座殼屬和葉點霉屬為光枝勾兒茶的優勢屬，主要分布在葉和莖中。本次分析結果發現貴陽和黔西分離到的菌株類群具有一定的相似性和差異性，莖和葉所得內生真菌的相似性最高，不同組織間菌株類群存在差異，莖中內生真菌群落香農-維納多樣性指數最高，果實中最低，表明內生真菌在植物中表現出一定的組織特異性和偏好性。宋靜靜等（2022）從廣西夾竹桃中分離的內生真菌中，刺盤孢屬和球座菌為優勢屬，主要分布于莖和葉，與本次研究對象內生真菌分布相同。呂佳等（2022）研究發現廣東肉桂葉、枝、根和皮中均有內生真菌分布，葉的香農-維納多樣性指數最高。貴州馬尾松的根部內生真菌多樣性最高，其次是莖，最后是葉，莖與根內生真菌相似性最高（羅鑫和于存，2021）。以上結果表明，本次采集樣本地貴陽和黔西，兩地海拔、光照、氣溫及降雨不同，其內生真菌的組成可能受到地域的影響；同一植物不同組織也可能受光照、溫度、濕度等影響因素，致使其內生真菌產生組織分布差異。因此，在進行植物內生真菌的研究中，應盡量多地域、多部位進行菌株分離，以更全面地體現植物內生真菌的分布及多樣性。此次研究結果首次分離得到貴州光枝勾兒茶內生真菌可培養菌株，揭示了貴州光枝勾兒茶內生真菌類型及分布特性，為進一步探究內生真菌物種次級代謝產物活性方面提供了素材，同時也為下一步植物與內生真菌之間相互影響的研究奠定了基礎。

研究通過測試23 株不同類群內生真菌對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和沙門氏菌的抑制活性，篩選到21 株菌株具有不同程度的抑菌活性的內生真菌菌株，對3 種測試菌均有抑菌活性的有20 株，分別分布于間座殼屬、葉點霉屬、鐮刀菌屬、刺盤孢屬及煙管菌屬等多個類群，此結果表明光枝勾兒茶內生真菌在醫藥開發方面存在較大的潛在研究及應用價值。從黔西光枝勾兒茶的根部中分離到的間座殼屬菌株Diaporthe sp. QX4G6提取物抑菌效果最好，據文獻報道，間座殼屬是活性代謝產物較為豐富的真菌類群，廣泛分布于世界各地和多種植物中，目前已從該屬內生真菌中分離出了200 多個化合物，包括聚酮類、生物堿類、萜類、蒽醌類、羥基化不飽和脂肪酸等，其中部分化合物顯示出抗菌、抗腫瘤、抗高血脂癥、抗寄生蟲、抗氧化及保護植物等生物活性（蔡佳等，2021）。Li等（2015）從Diaporthe sp. LG23 代謝產物中分離得到1 個新羊毛脂甾烷型四環三萜化合物19-nor-lanosta-5，對革蘭氏陰性、陽性細菌均表現出明顯的抗菌作用，Nishad等（2021）從內生真菌Diaporthe longicolla粗提物中分離得到2，4-di-tert-butyl phenol單體化合物，對金黃色葡萄球菌抑菌活性明顯?；谏鲜鲅芯炕A及應用前景，間座殼屬真菌類群獨特的次級代謝產物生產能力成為了活性化合物的重要潛在來源之一，作為候選菌株獲得活性物質是未來一大研究方向（Nagarajan et al.， 2021）。本研究結果分離菌株雖表現出廣譜的抑菌活性， 但MIC和MBC值不夠理想， 推測分析可能因為多個物質之間的作用對結果產生了一定的干擾。為進一步追蹤活性物質來源，下一步研究將Diaporthe sp. QX4G6做為目標菌株進行大量發酵，通過化學手段進行結構鑒定，測定評價每個單體物質的抑菌活性，以篩選獲得具有顯著抑菌活性的單一化合物，為藥物先導分子的挖掘提供備選藥源，具有重要的科學意義和潛在的應用價值。

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（責任編輯 周翠鳴）