血清OPN、sPD-L1、miR-370在急性髓系白血病中的表達及與危險分層的關系

劉冰,王舒,楊瑩

急性髓系白血病(acute myelogenous leukemia,AML)是因髓系造血干細胞發生惡性病變,誘使外周血與骨髓內的髓性細胞異常增生,從而轉移入侵旁系器官與非造血組織,致使自發性出血、貧血、器官衰竭等惡性事件發生,甚至危及患者生命的惡性腫瘤[1]。據相關報道[2],AML發病率占白血病總發病率20%左右,其惡性程度高于其他類型白血病,60歲以上AML患者10年生存率低于5%。故及早發現并進行治療,對延長患者預后生存時間極為重要。近年來,多位學者[3-4]發現AML發生發展與細胞凋亡、血管再生密切相關。其中,骨橋蛋白(OPN)是促進腫瘤血管生成的重要因子,可參與腫瘤浸潤與轉移的多項環節[5];可溶性程序性死亡因子配體-1(sPD-L1)通過與程序性死亡因子結合發生反應,進而保護腫瘤細胞免受免疫細胞殺死,最終促使腫瘤發生惡性病變[6];微小RNA-370(miR-370)屬于腫瘤抑制因子,可抑制多種腫瘤的發生發展[7]。因此,本研究選取我院診治的79例AML患者作為研究對象,分析血清OPN、sPD-L1、miR-370與不同危險分層AML的關聯性?，F報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2021年11月—2023年2月我院診治的79例AML患者作為研究對象,參照文獻[8]中的分層標準將患者分為低危組(n=26)、中危組(n=39)和高危組(n=14)。3組一般資料比較,差異無統計學意義(P>0.05)。本研究已獲得我院醫學倫理委員會批準(倫理審批號：20231024-01)。

表1 3組一般資料比較

1.2 納入與排除標準 納入標準：(1)符合AML的診斷標準[8];(2)臨床資料完整;(3)預計生存期>1年。排除標準：(1)重要臟器器官發生器質性病變患者;(2)并發全身性疾病患者;(3)精神系統、免疫系統疾病患者;(4)入組前已接受相關治療患者;(5)其他類型白血病患者;(6)對本研究藥物過敏患者;(7)存在心源性休克、永久性心臟內傳導紊亂;(8)妊娠期或哺乳期女性。

1.3 方法

1.3.1 治療方法 靜脈注射鹽酸阿糖胞苷1～3 mg/kg(國藥一心制藥,國藥準字：H20040822,規格：0.3 g),1～2次/天,連續注射3 d;鹽酸米托蒽醌(浙江瑞新,國藥準字：H10960120,規格：5 mg)溶于NaCl注射液(50 mL)或5%葡萄糖注射液中滴注,一次4～8 mg/m2,1次/天,連續滴注3 d,間隔2～3周。根據患者臨床治療反應及時調整,周期為1個月。

1.3.2 檢測方法 采集患者治療前后清晨空腹靜脈血5 mL。其中3 mL血液樣本使用離心機(貝克曼Avanti J-15)3 500 r/min離心15 min分離血清,放置于-80 ℃冰箱冷凍保存。采用酶聯免疫吸附法測定血清OPN、sPD-L1水平;采用熒光定量PCR儀(產地：美國ABI公司)應用2-△△Ct方法計算miR-370-3p;剩余2 mL血液樣本放置于10%乙二胺四乙酸二鈉30 μL試管混勻后,采用全自動血細胞分析儀(邁瑞6800)測定WBC、血紅蛋白(Hb)水平。

1.3.3 分層標準 低危：Inv(16)or t(16;16);CBFB-MYH11;t(8;21) (q22;q22.1);RUNX1-RUNX1T1;NPM1突變不伴有FLT3—ITD突變或伴有ITD突變;以及雙等位基因CEBPA突變。中危：NPM1突變和FLT3-ITD^high突變;野生型NPM1不伴有FLT-ITD突變或者伴有FLT3ITD^low突變(不伴有不良細胞遺傳學異常);(t9;11)(p21.3;q23.3);MLLT3-KMT2A;未分到預后良好或者預后不良組的細胞遺傳學異常。高危：(t6;9)(p23;q34.1);DEK-NUP214;(tv;11q23.3);KMT2A重排;(t9;22)(q34.1;q11.2);BCR-ABL1;inv(3)(q21.3q26.2)或者(t3;3)(q21.3;q26.2);GATA2,MECOM(EVI1)-5或者de(I5q);-7;-17/abn(17p)復雜染色體異常^2,染色單體野生型NPN1以及FIT3-ITD^high突變、RUNX1突變^3、ASXL突變^3、TP53突變。

1.4 觀察指標 (1)比較3組治療前后血清OPN、sPD-L1、miR-370水平;(2)比較3組治療前后WBC、Hb水平;(3)采用Pearson分析治療前后血清OPN、sPD-L1、miR-370水平與WBC、Hb水平的相關性;(4)采用受試者工作特征曲線(ROC)分析治療前血清OPN、sPD-L1、miR-370水平聯合檢測對AML患者危險分層情況的診斷價值。

2 結果

2.1 3組血清OPN、sPD-L1、miR-370水平比較 3組治療前后血清OPN、sPD-L1、miR-370水平低危組<中危組<高危組,差異具有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 3組治療前后血清OPN、sPD-L1、miR-370水平比較

2.2 3組WBC、Hb水平比較 3組治療前后血清WBC水平比較：低危組<中危組<高危組,差異具有統計學意義(P<0.05);血清Hb水平比較：低危組>中危組>高危組,差異具有統計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 3組治療前后WBC、Hb水平比較

2.3 治療前后血清OPN、sPD-L1、miR-370水平與WBC、Hb水平的相關性 AML患者治療前后血清OPN、sPD-L1、miR-370水平與WBC水平呈正相關,與Hb水平呈負相關,差異具有統計學意義(P<0.05)。見表4。

表4 治療前后血清OPN、sPD-L1、miR-370水平與WBC、Hb水平的相關性

2.4 血清OPN、sPD-L1、miR-370聯合檢測不同病情程度患者的診斷價值 以低?；颊邽殛栃詷颖?以中高?；颊邽殛幮詷颖纠L制ROC曲線,結果顯示,治療前血清OPN、sPD-L1、miR-370聯合檢測的AUC為0.942,最佳敏感度、特異度分別為84.62%、92.45%(P<0.05)。見表5,圖1。

圖1 血清OPN、sPD-L1、miR-370聯合檢測診斷AML的ROC曲線

表5 血清OPN、sPD-L1、miR-370聯合檢測不同病情程度患者的診斷價值

3 討論

OPN是一種具有細胞因子活性的糖蛋白,由多種組織細胞合成分泌,可參與介導細胞黏附、免疫應答、腫瘤侵襲轉移、血管生成及促炎癥反應等多種生理病理生物學過程[9-11]。研究[12]發現,OPN通過與自身受體、CD44結合,以調控下游效應基因的表達,進而轉導有關細胞信號通路,最終促使腫瘤血管生成。王海玲等[13]研究發現,白血病細胞基因表達與蛋白分泌水平會影響OPN表達。本研究針對危險分層進行分組,發現3組治療前后OPN水平均隨疾病程度加深呈下降趨勢,表明OPN可能參與了疾病進展。后選取可直接反映疾病是否發生的“金標準”指標對比其治療前后水平發現,WBC隨疾病程度加深呈上升趨勢,Hb水平隨疾病程度加深呈下降趨勢,均可直觀反映疾病是否發生及疾病嚴重程度。本研究采用Pearson分析WBC、Hb與OPN的相關性發現,OPN與WBC水平呈正相關,與Hb水平呈負相關,證實OPN與疾病有關聯性,與王海玲等[13]研究觀點相似。其原因在于,白血病細胞為了獲取足量營養成分,會激活有關信號轉導途徑,促使OPN濃度上升,建立新生血管通路,從而間接誘使病情惡化。

血清sPD-L1可作為反映細胞凋亡的細胞因子,主要分布于樹突狀細胞、淋巴細胞、腫瘤細胞內[14-15]。吳福群等[16]研究發現,AML患者治療前后血清sPD-L1與血管內皮生長因子水平成正比(r1=0.447,r2=0.327),表明惡性細胞生長的內環境(sPD-L1)與惡性細胞增殖的外環境(血管內皮生長因子)互相影響。本研究Pearson分析顯示血清sPD-L1與WBC、Hb密切相關,進一步說明了高濃度sPD-L1影響機體免疫功能運轉,一定程度上會抑制Hb生成,使得機體處于惡性循環。本研究采用ROC發現,血清sPD-L1診斷AML,AUC為0.823,最佳敏感度、特異度為88.46%、69.81%,表明該指標具有較高的診斷效能,但特異性較低不利于臨床辨別相似癥狀疾病,故建議與其他特異性較好指標聯合使用以充分發揮該指標臨床應用價值。推測其原因在于,當sPD-L1水平上升時,通過促使sPD-L1與自身受體程序性細胞死亡受體結合,傳導抑制信號,抑制T細胞活化,影響免疫系統的正常運轉,從而導致大量惡性造血干細胞避過免疫殺傷,影響細胞正常凋謝,最終致使疾病發生發展[17]。

miR-370是一種參與細胞增殖、轉移、侵襲等活動的腫瘤標志物[18-20]。王慶義等[2]研究發現,miR-370-3p表達與治療反應、風險狀況、有無復發、WBC水平密切相關,且治療完全緩解、無復發、高水平WBC患者miR-370-3p水平呈上升趨勢。本研究發現不同危險分層患者治療后疾病轉歸情況均不相同,治療后低?；颊適iR-370水平趨于正常,中高?；颊唠m有較大改善,但仍處于危險范圍,再次說明miR-370與風險狀況、WBC水平密切相關,與王慶義等[2]研究觀點相似。后經ROC分析結果顯示,血清miR-370檢測效能>0.7,表明miR-370具有一定臨床使用價值且與疾病關聯程度較高。

為深入驗證血清OPN、sPD-L1、miR-370與AML的關聯性及聯合檢測效能,故而繪制聯合ROC曲線,發現治療前血清聯合檢測可判斷患者危險程度。

綜上所述,血清OPN、sPD-L1、miR-370水平與AML病情程度、分層情況密切相關,可為臨床診療提供參考。但本研究樣本容量較小且未觀察患者預后轉歸情況,其結果數據也可能存在偏倚,故后續研究者可進一步擴充樣本量,以觀察治療前后緩解患者與未緩解患者間水平變化,從而為臨床提供診療依據。