弩藥液的刺激及過敏試驗研究

鄧萬娟 梁瀟 劉嬌 蔡敏芳 胡濤 羅萍 阮婧華 錢海兵

摘要：目的? 評價弩藥液的皮膚刺激性及皮膚過敏性，為弩藥液的應用提供安全依據。方法? 皮膚刺激性試驗：家兔4只，雌雄各半。采用自身對照，左側為對照部位（溫水），右側為給藥部位（弩藥液），連續給藥14 d，觀察涂抹藥局部有無紅斑、水腫等反應，進行皮膚刺激反應及刺激強度評分，并取給藥部位皮膚進行組織病理學檢查。皮膚過敏性試驗：豚鼠30只，雌雄各半，分為對照組（溫水）、2-4二硝基氯苯陽性組（致敏1.0% 0.2 ml/只、激發0.1% 0.2 ml/只）和給藥組（弩藥液適量），于第1、7、14天在豚鼠左側致敏，末次致敏結束后第14 d，右側進行激發接觸，并于激發后1、24、48和72 h觀察過敏反應情況，計算各組豚鼠反應平均值和致敏率。結果? 弩藥液皮膚刺激試驗中，皮膚反應積分均值為0，皮膚刺激強度為無刺激性，病理檢查均未見組織病理學改變；在豚鼠皮膚過敏性試驗中，弩藥液組及對照組豚鼠激發接觸72 h內觀察，皮膚無紅斑及水腫現象出現，其反應級別平均值為0，致敏率為0。結論? 在家兔皮膚刺激性試驗和豚鼠皮膚過敏性試驗中，弩藥液對家兔皮膚無刺激性，對豚鼠皮膚無過敏性。

關鍵詞：弩藥液；皮膚刺激性；皮膚過敏性

中圖分類號：R859.79? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻標識碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2024.04.016

文章編號：1006-1959（2024）04-0090-05

Experimental Study on Irritation and Allergy of Crossbow Medicine

DENG Wan-juan1，2，3，LIANG Xiao1，2，3，LIU Jiao1，2，3，CAI Min-fang1，2，3，HU Tao1，2，3，LUO Ping1，2，3，RUAN Jing-hua4，QIAN Hai-bing1，2，3

（1.Basic Medical College of Guizhou University of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550025，Guizhou，China;

2.Guizhou University of Traditional Chinese Medicine Guizhou Province Authentic Medicine Sexual Utility

Consistency Research Center，Guiyang 550025，Guizhou，China;

3.Guizhou Provincial Key Laboratory of Research on Properties and Effects of Traditional Chinese Medicine ， guiyang of guizhou 550025;

4.The First Affiliated Hospital of Guizhou University of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550001，Guizhou，China）

Abstract：Objective? To evaluate the skin irritation and skin allergy of crossbow medicine， and to provide a safety basis for the application of crossbow medicine.Methods? Skin irritation test： four rabbits， half male and half female. Using self-control， the left side was the control site （ warm water ）， and the right side was the administration site （crossbow medicine）. After 14 days of continuous administration， the local erythema and edema were observed， and the skin irritation reaction and stimulation intensity were scored. The skin of the administration site was taken for histopathological examination. Skin allergy test： thirty guinea pigs， half male and half female， were divided into control group （warm water）， 2-4-dinitrochlorobenzene positive group （sensitization 1.0% 0.2 ml/guinea pig， challenge 0.1% 0.2 ml/guinea pig） and administration group （appropriate amount of crossbow liquid）. Guinea pigs were sensitized on the left side on the 1st， 7th and 14th day， and challenged on the right side on the 14th day after the last sensitization. Allergic reactions were observed at 1 h， 24 h， 48 h and 72 h after challenge， and the average reaction and sensitization rate of guinea pigs in each group were calculated.Results? In the skin irritation test of crossbow medicine， the mean value of skin reaction score was 0， the intensity of skin irritation was non-irritation， and no histopathological changes were found in pathological examination. In the skin allergy test of guinea pigs， no erythema and edema were observed in the skin of guinea pigs in the crossbow medicine group and the control group within 72 h， and the average reaction level was 0， and the sensitization rate was 0.Conclusion? In the rabbit skin irritation test and guinea pig skin allergy test， the crossbow medicine has no irritation to rabbit skin and no allergy to guinea pig skin.

Key words：Crossbow medicine;Skin irritation;Skin allergy

苗藥弩藥液是由大血藤、飛龍掌血、透骨香、白屈菜、黑骨藤組成，具有活血化瘀，祛風止痛的功能。常用于骨關節炎、類風濕等引起的關節疼痛[1，2]，亦可用于癌性疼痛輔助治療。苗藥弩藥液在苗族地區廣泛使用，并在貴州中醫藥大學第一附屬醫院已進行臨床應用，具有一定療效。本研究按照國家食品藥品監督管理總局的《藥物刺激性、過敏性和溶血性研究技術指導原則》要求進行了刺激性及全身主動過敏反應（ASA）試驗，旨在為臨床應用提供安全性實驗數據。

1材料與方法

1.1儀器? 組織切片機（浙江省金華市科迪儀器設備有限公司，型號：RM2265）；電子天平（常熟市雙杰測試儀器廠，型號：JJ224B）；倒置顯微鏡（奧林巴斯公司，型號：BX53F）。

1.2藥品與主要試劑? 弩藥液（由貴州中醫藥大學第一附屬醫院制劑中心提供，批號：20211201）；2-4二硝基氯苯[西亞化學科技（山東）有限公司，批號：20220504]。

1.3實驗動物? 普通級新西蘭兔4只，體重1.5～2 kg，雌雄各半；豚鼠30只，體重300～400 g，雌雄各半；購于重慶騰鑫生物技術有限公司，實驗動物許可證號：SCXK（渝）2017-0010。實驗性喂養7 d后開始試驗。

1.4方法

1.4.1皮膚刺激性試驗[3-5]? 選用健康、成年、皮膚無破損的普通級新西蘭兔4只，雌雄各半，適應性喂養7 d。試驗前24 h將動物背部脊背兩側去毛，不損傷表皮，面積約為3 cm×3 cm。蘸取弩藥液涂抹于左側去毛皮膚上，用塑料薄膜外包，再用無刺激性膠布、紗布固定，維持4 h后用溫水清洗，右側作為空白對照部位，涂抹溫水，1次/d，連續外敷14 d，并于1 h后觀察涂抹藥局部有無紅斑、水腫等反應情況，按表1、表2進行皮膚刺激反應及刺激強度評分，皮膚刺激反應平均值=（紅斑形成總分+水腫形成總分）/合計動物數。第14天維持4 h溫水清洗觀察反應情況后，空氣栓塞法處死家兔，剪去給藥部位皮膚及皮下組織，進行固定、脫水、透明及浸蠟，常規石蠟包埋切片，HE染色后觀察其組織病理變化。

1.4.2皮膚過敏性試驗[6-8]? 選用豚鼠30只，適應性喂養7 d后，采用完全隨機設計分為3組，對照組（溫水）、陽性組（2-4二硝基氯苯，致敏1.0% 0.2 ml/只、激發0.1% 0.2 ml/只）和給藥組（弩藥液適量），每組10只，雌雄各半。試驗前24 h動物背部脊背兩側去毛，不損傷表皮，面積約為4 cm×4 cm。蘸取弩藥液、溫水、1.0% 2-4二硝基氯苯涂抹于左側去毛皮膚上，用塑料薄膜外包，再用無刺激性膠布、紗布固定，維持6 h后用溫水清洗。于第1、7、14天致敏3次，末次致敏結束后第14天，蘸取弩藥液、溫水、0.1% 2-4二硝基氯苯涂抹于右側去毛皮膚上，進行激發接觸，維持6 h后用溫水清洗，并于第1、24、48和72 h觀察豚鼠皮膚紅斑、水腫等其他過敏反應情況。按上述表1、表2計算皮膚過敏反應平均值及致敏率。皮膚過敏反應平均值=（紅斑形成總分+水腫形成總分）/合計動物數，致敏率=皮膚過敏反應陽性（不論程度輕重）動物數/受試動物總數，致敏率：0～10%，無致敏性；11%～30%，輕度致敏性；31%～60%，中度致敏性；61%～80%，高度致敏性；81%～100%，極度致敏性。反應平均值=（紅斑形成總分 + 水腫形成總分）/合計動物數。

1.5統計學方法? 利用Excel軟件計算皮膚刺激反應平均值、皮膚過敏反應平均值及致敏率。

2結果

2.1皮膚刺激性試驗? 弩藥液完整性皮膚連續14 d局部給藥，4只家兔給藥側及對照側均未出現紅斑、水腫等反應情況，且皮膚刺激分值均為0，見圖1。

2.2弩藥液刺激性試驗皮膚組織病理情況? 組織病理學檢查顯示，家兔的給藥側和對照側皮膚結構正常清晰，均未見棘層及角質層萎縮變薄，無表皮壞死或炎性細胞浸潤等病理改變，見圖2。

2.3皮膚過敏性試驗? 弩藥液組及對照組（溫水）豚鼠激發接觸72 h內觀察，皮膚無紅斑及水腫現象出現，其反應級別平均值為0，致敏率為0；陽性對照組紅斑、水腫現象明顯表現為不同級別的致敏反應指征、致敏率100%，見圖3、表3。

3討論

苗醫藥理論認為，人體的生靈能（相當于中醫的正氣）不足時，毒邪就會內侵，所以苗醫“毒學說”認為“百病由毒而生，毒為百病之源”“無毒不致病，無亂不成疾”[9]，并且把祛除毒素作為防治疾病的重要手段，總結形成了“治毒九法”，即攻毒法、表毒法、趕毒法等，以應對毒邪[10]。弩藥液便是用“以毒攻毒”的方式去治療疾病[11]。弩藥液由黑骨藤、大血藤、透骨香、白屈菜、飛龍掌血組成的棕色液體，具有活血化瘀、祛風止痛的功效[12]。苗藥弩藥源自古代苗人射殺動物涂于弓箭上的劇毒藥物，后經過減毒[13]，多次改進，目前已經成為一個質量穩定可控、療效確切的外用醫院制劑，常將弩藥液直接涂抹于患處或與傳統弩針聯合應用以及用弩藥桑枝棒[14]。

透皮給藥是弩藥液的療效作用精髓，通過苗醫理論中的“汗窟”和“毛窟”，將弩藥送入患處皮肉經脈之間，從外治內，從而達到“攻毒”的作用[15]。弩藥液中黑骨藤（性熱）為領頭藥，具有舒筋活血、祛風除濕的功效；大血藤（性冷）、透骨香（性熱）等鋪底藥，具有加強領頭藥祛風除濕的作用和活血止痛的功效，再加以米酒，引諸藥入血脈，兼以行氣止痛，散瘀止痛[16]。其中弩藥液的各味藥，包括黑骨藤[17]、大血藤[18，19]、透骨香[20]、白屈菜[21]、飛龍掌血[22]等現代藥理研究均已證實具有抗炎和鎮痛等藥理作用，所以弩藥液具有顯著的抗炎鎮痛作用。弩藥液在臨床上廣泛用于治療項痹、腰痹等疼痛類和風類疾病[23]，且目前弩藥液利用噴霧器進行外用，方便高效。

由于弩藥液中的黑骨藤、白屈菜、飛龍掌血等藥物具有毒性，所以弩藥液對皮膚的刺激性和過敏性仍是臨床中需重視的問題。本研究用家兔和豚鼠對弩藥液進行皮膚刺激性和過敏性試驗，可為弩藥液臨床安全用藥提供一定的參考。皮膚刺激性試驗中，與對照側對比發現，弩藥液給藥側皮膚刺激反應平均值為0，且弩藥液給藥側皮膚未出現紅斑、水腫等異常表現。并且與對照側相比，弩藥液給藥側皮膚的病理檢查也未見組織病理學改變，因此認為弩藥液對家兔完整皮膚無刺激性反應。

皮膚過敏性試驗中，豚鼠主動皮膚過敏性試驗3次致敏后，陽性組受試藥物區域均出現輕度至中度紅斑、水腫，隨后出現皸裂結痂；在激發之前均恢復正常，弩藥液給藥組和對照組均未見紅斑、水腫等異常表現。激發階段，陽性組動物激發后1 h即刻出現過敏反應，出現輕度至中度紅斑、水腫，72 h后恢復，致敏率為100%，皮膚過敏反應平均值在1.7～1.9，弩藥液給藥組和對照組動物給藥部位均未出現紅斑、水腫等異常表現以及哮喘、站立不穩、休克等嚴重全身過敏反應，致敏率為0，皮膚過敏反應平均值為0。因此認為弩藥液對豚鼠完整皮膚無過敏性反應。

整個皮膚試驗過程中，未出現試驗動物死亡的情況。弩藥液皮膚刺激性試驗以及皮膚過敏性試驗研究均符合相關國家規范和要求。本實驗研究證明了弩藥液對皮膚的安全性，驗證了弩藥液是一種無刺激、無致敏、安全性高的外用制劑，為進一步深入研究和臨床應用提供參考。

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收稿日期：2023-02-28；修回日期：2023-04-07

編輯/肖婷婷