丹桂口服液質量標準研究

李彩霞 趙麗萍

（酒鋼醫院藥學部，甘肅 嘉峪關 735100）

丹桂口服液是酒鋼醫院根據臨床需要，創新研發的純中藥制劑，由丹參、郁金、鉤藤、桑寄生、桑葉、生地黃、生山楂、當歸、懷牛膝、桂枝、白芍、甘草、川芎等組成。其中丹參、當歸養血活血化瘀；郁金、川芎行氣散瘀；鉤藤平肝潛陽；桑寄生、懷牛膝補肝益腎、引火下行；桑葉疏風清熱、清肝明目，還有抗凝血、降血壓、降血脂的功效；生地黃滋陰生津、清熱涼血；白芍斂陰養血、養陰柔肝，以平血逆涼血活血；諸藥與甘草合用，辛甘化陽、行氣通陽。因此該制劑具有平肝降逆、通陽舒痹、滌痰活血的功效，可治療眩暈胸痹，不僅對頭暈、頭脹、胸悶、心悸、心慌有減輕的作用，還可以治療高血壓病。由于原方劑為湯劑，需現煎服用，攜帶、服用都不方便，且服用劑量大、口感不佳，導致患者用藥依從性下降。因此將其制成口服液，不僅便于攜帶保存，而且該劑型是將原湯劑濃縮后加入矯味劑，服用量減少，口感佳，大大提高了用藥依從性，造福廣大患者。但是制備口服液需經過提取的工藝。為保證中藥制劑的質量和臨床療效，文章研究出丹桂口服液中丹參、白芍、甘草等成分的薄層色譜鑒別法，為其質量控制標準提供了有效的科學依據。

1 儀器與試劑

1.1 儀器HX-TLC-3H 型薄層顯色加熱板（武漢恒信世紀科技有限公司）；AUW220D 型電子分析天平（日本島津公司）；UV756MC 型紫外可見分光光度儀（奧譜勒公司）；KMH1-1100U 型超聲清洗儀（廣東固特超聲股份有限公司）；ZF-20A 型暗箱四用紫外分析儀。

1.2 試劑丹參對照藥材（批號：120923-201414）、甘草對照藥材（批號：120904-201318）、芍藥苷（批號：110736-201640）均來自中國食品藥品檢定研究院；丹桂口服液（酒鋼醫院試生產，批次分別為20200310、20200410、20200510）。所用化學試劑均選用分析純。

2 定性鑒別

2.1 丹參

2.1.1 供試品溶液的制備取丹桂口服液20 mL 置于分液漏斗中，加入稀鹽酸調節pH 值至2；加入乙酸乙酯20 mL，振搖分液漏斗提取2次，分離出乙酸乙酯液；合并2 次提取液至蒸發皿中，置水浴鍋上蒸干；殘渣加入2 mL甲醇溶解，作為供試品溶液。

2.1.2 對照藥材溶液的制備取丹參對照藥材0.5 g，加入少量水煎煮30 min，濾過；濾液加水至20 mL，其后制備方法同供試品溶液，制成對照藥材溶液。

2.1.3 陰性對照品溶液的制備取缺丹參的陰性供試品，同供試品溶液的制備方法，制成陰性對照溶液。

2.1.4 薄層色譜法（TLC）試驗參考《中華人民共和國藥典》2015 年版一部［1］附錄Ⅵ B，用5 μL 點樣管分別吸取上述3 種溶液各5 μL，分別條帶狀點樣在同一硅膠G 板上，展開劑為三氯甲烷-丙酮-甲酸（25∶10∶4）；展開距邊緣線1 cm 時取出，晾干后至展開缸用氨蒸氣熏蒸10 min，再放至ZF-20A型暗箱四用紫外分析儀中，于365 nm 下檢視。3 批樣品與丹參對照藥材的相同色譜位置上，顯相同顏色的淡藍色熒光斑點，而陰性對照在相應位置上無此斑點。見圖1。

圖1 丹參薄層色譜鑒別圖（紫外燈365 nm）

2.2 白芍

2.2.1 供試品溶液的制備取丹桂口服液20 mL 置于分液漏斗中，加入乙醚10 mL，振搖分液漏斗提取2次；棄去乙醚液，再加入用水飽和的正丁醇15 mL，振搖提取2次；合并正丁醇液，加水20 mL，洗滌2次；蒸干，殘渣加入1 mL甲醇溶解，作為供試品溶液。

2.2.2 對照藥材溶液的制備取芍藥苷對照品，加甲醇制成濃度為2 mg/mL的對照品溶液。

2.2.3 陰性對照品溶液的制備取缺白芍的陰性供試品20 mL 置于分液漏斗中，其后制備方法同供試品溶液，制成陰性對照溶液。

2.2.4TLC試驗參照《中華人民共和國藥典》2015 年版一部［1］附錄Ⅵ B，用5 μL的點樣管取上述3種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G板上，展開劑為三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-濃氨（8∶1∶4∶1）；展開距邊緣線1.5 cm時取出晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，放置在薄層顯色加熱板上加熱至105 ℃，直至斑點顯色清晰，立即取下，于日光下觀察。3 批樣品均與對照品在相對應的色譜位置上顯相同的紫色條帶狀斑點，陰性對照在此處無斑點［2］。見圖2。

圖2 白芍薄層色譜鑒別圖（日光）

2.3 甘草

2.3.1 供試品溶液的制備取丹桂口服液30 mL 置于分液漏斗中，每次加入20 mL 正丁醇，共萃取3 次；合并正丁醇液，用水洗滌3 次；棄去水液，余下正丁醇液蒸干，殘渣加入2 mL甲醇溶解，作為供試品溶液。

2.3.2 對照藥材溶液的制備取甘草藥材粉末1 g置于圓底燒瓶中，加入40 mL 乙醚，水浴加熱回流1 h，濾過，棄去乙醚液；藥渣加入30 mL 甲醇，繼續水浴加熱回流1 h，濾過；藥渣置分液漏斗中，加入40 mL 水溶解，正丁醇振搖提取3次，每次20 mL；合并正丁醇液，用水洗滌3 次，棄去水液；正丁醇液蒸干，殘渣加5 mL 甲醇溶解，制成對照藥材溶液。

2.3.3 陰性對照品溶液的制備取缺甘草的陰性供試品30 mL 置于分液漏斗中，其后制備方法同供試品溶液，制成陰性對照溶液。

2.3.4TLC試驗參照《中華人民共和國藥典》2015 年版一部［1］附錄Ⅵ B，取5 μL點樣管吸取上述3種溶液各2 μL，分別點于同一硅膠G 薄層板上，展開劑為乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（15∶1∶1∶2）；展開距邊緣線1.5 cm 時取出晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，放置在薄層顯色加熱板上加熱至105 ℃，直至斑點顯色清晰；放至ZF-20A型暗箱四用紫外分析儀中，于365 nm 下檢視，或直接置于日光下檢視。在供試品色譜中，紫外365 nm下檢視3 批樣品，在與對照藥材色譜相應位置上應顯相同藍色熒光斑點；日光下檢視3 批樣品，在與對照藥材溶液色譜相應位置上應顯3 個相同黃色的斑點［1］。見圖3。

圖3 甘草TLC圖譜（左紫外燈365 nm，右日光）

3 討論

在做丹桂口服液中丹參的定性鑒別時，最先使用《中華人民共和國藥典》2015 年版一部［1］中收載的丹參藥材鑒別法，展開劑為三氯甲烷-甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸（6∶4∶8∶1∶4），展開至約4 cm 取出，晾干；再以石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯（4∶1）為展開劑，展開至約8 cm，取出，晾干；分別在日光及紫外光燈（波長365 nm）下檢視。結果顯示樣品的比移值小，且陰性有干擾。經反復查閱文獻后，發現pH、溫度、濕度對其比移值影響較大，之后選取不同的展開劑及薄層色譜方法，對丹桂口服液中丹參的薄層鑒別進行比較，比對各種方法的展開情況、分離度、清晰度、Rf 值等結果后，參考文獻［3］將樣品和陰性對照同時加稀鹽酸調節pH 值至2后，加入有機溶劑提取制備供試品，以三氯甲烷-丙酮-甲酸（25∶10∶4）為展開劑，展開取出晾干。至展開缸用氨蒸氣熏蒸10 min 后至紫外燈365 nm 下檢視［4］，溫度控制在20～25 ℃，主斑點Rf 值在0.3～0.8。此條件下主要的斑點不受處方中其他藥材成分的干擾，斑點清楚，分離度好，可作為丹桂口服液中丹參的薄層鑒別方法［3］。

對丹桂口服液中的白芍做薄層鑒別時，最初斑點不清晰，陰性有干擾，發現在顯色這一步驟時烘烤溫度過高、時間過長，會導致樣品、陰性對照以及對照藥材均在相應位置顯現出斑點。這是由于其他雜質成分在相同位置有干擾。在后續鑒別過程中發現，只要控制好顯色時的烘烤溫度及時間，薄層鑒別結果明顯，清晰地顯現出芍藥苷紫色的特有斑點，陰性無干擾［4］。

對丹桂口服液中的甘草做薄層鑒別時，選用《中華人民共和國藥典》收載方法處理樣品，要求在紫外燈365 nm下結果檢視，但是本實驗發現在日光下檢視可直接觀察出樣品和對照藥材相對應的斑點，且陰性無干擾［5］。由于丹桂口服液含有10余種中藥材，又經過煎煮提取，多種成分混合在一起，導致鑒別時干擾因素多。因此選用多種有機溶劑，進行反復分離提純鑒別。本實驗對丹桂口服液中的主要藥材丹參、白芍、甘草的薄層鑒別方法進行研究，發現3 批丹桂口服液質量穩定，制定出的定性方法專屬性強、重復性高；且該方法操作快捷、簡便，結果準確、穩定性好，可用于丹桂口服液的質量控制［6］。