黃芪陽和湯調控PI3K/AKT/NF-κB信號通路促進糖尿病足潰瘍大鼠創面愈合

鮑亞玲 雷慧 馬君 趙新梅

摘要：目的 基于磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）/核因子-κB（NF-κB）信號通路探究黃芪陽和湯對糖尿病足潰瘍（DFU）大鼠創面愈合的影響。方法 構建DFU大鼠模型，將建模成功的48只大鼠隨機分為模型組，黃芪陽和湯低（8.5 g/kg）、高（17 g/kg）劑量組，黃芪陽和湯高劑量（17 g/kg）＋LY294002（PI3K/AKT通路抑制劑，0.3 mg/kg）組；每組12只；另取12只大鼠為對照組。各組大鼠給予對應藥物干預，連續4周。第14、28天給藥后，觀察大鼠一般狀態及創面變化，計算創面愈合率，檢測大鼠空腹血糖（FBG）水平和大鼠創面周圍組織經皮氧分壓（TcpO2）；酶聯免疫吸附試驗檢測大鼠血清血管內皮生長因子（VEGF）、缺氧誘導因子-1α（HIF-1α）、C反應蛋白（CRP）、白細胞介素（IL）-6水平；蘇木素-伊紅染色觀察大鼠創面組織病理學變化；免疫組織化學染色測定大鼠創面組織微血管密度；蛋白免疫印跡法檢測大鼠創面組織中PI3K、磷酸化PI3K（p-PI3K）、AKT、磷酸化AKT（p-AKT）、NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65（p-NF-κB p65）、NF-κB抑制蛋白α（IκB-α）蛋白表達。結果 對照組大鼠毛色光滑，飲食、飲水、排泄均正常，較活躍，創面愈合快，創面組織炎癥反應較輕，新生血管較多，肉芽組織中成纖維細胞及膠原基質豐富；模型組大鼠毛色暗淡無光澤，活動減少，且出現多飲、多食、多尿癥狀，創面顏色較深，且周圍組織出現水腫、潰瘍，創面組織可見大量炎性細胞浸潤，伴組織壞死、滲出，新生血管及成纖維細胞較少，創面愈合率、創面周圍組織TcpO2、血清VEGF、HIF-1α、創面組織微血管密度、p-PI3K、p-AKT、IκB-α蛋白表達水平降低，FBG、血清CRP、IL-6、創面組織p-NF-κB p65蛋白表達升高（P＜0.05）；與模型組相比，黃芪陽和湯低、高劑量組大鼠狀態逐漸改善，創面組織病變程度依次減輕，創面愈合率、創面周圍組織TcpO2、血清VEGF、HIF-1α、創面組織微血管密度、p-PI3K、p-AKT、IκB-α蛋白表達水平依次升高，FBG、血清CRP、IL-6、創面組織p-NF-κB p65蛋白表達依次降低（P＜0.05）；LY294002能部分逆轉高劑量黃芪陽和湯對DFU大鼠的治療作用（P＜0.05）。結論 黃芪陽和湯能調控PI3K/AKT/NF-κB信號通路，抑制DFU大鼠炎癥反應，促進血管新生，從而促進創面愈合。

關鍵詞：黃芪陽和湯；糖尿病足潰瘍；創面愈合；磷脂酰肌醇3-激酶；蛋白激酶B；NF-κB

中圖分類號：R285.5文獻標志碼：ADOI：10.11958/20230561

Huangqi Yanghe Decoction regulates PI3K/AKT/NF-κB signaling pathway to promote

wound healing in diabetes foot ulcer rats

BAO Yaling1， LEI Hui1△， MA Jun2， Zhao Xinmei2

1 Zhangjiakou University， Zhangjiakou 075000， China; 2 Department of Endocrinology， Zhangjiakou First Hospital

△Corresponding Author E-mail： 115386879@qq.com

Abstract： Objective To explore the effect of Huangqi Yanghe Decoction on wound healing of diabetic foot ulcer （DFU） rats based on phosphatidylinositol 3-kinase （PI3K）/protein kinase B （AKT）/nuclear factor-κB （NF-κB） signal pathway. Methods DFU rat model was constructed， and 48 rats successfully modeled were randomly divided into the model group， the Huangqi Yanghe Decoction low （8.5 g/kg） group， the Huangqi Yanghe Decoction high （17 g/kg） dose group and the Huangqi Yanghe Decoction high dose （17 g/kg）+LY294002 （PI3K/AKT pathway inhibitor， 0.3 mg/kg） group. There were 12 rats in each group. Another 12 rats were selected as the control group. Rats in each group were given corresponding drug intervention for 4 weeks. After the 14th and 28th day-administration， the general state and wound changes of rats were observed， and the wound healing rate was calculated. The fasting blood glucose （FBG） level of rats was measured， and the percutaneous partial pressure of oxygen （TcpO2） of tissue around the wound was detected. Serum levels of vascular endothelial growth factor （VEGF）， hypoxia inducible factor-1α （HIF-1α）， C-reactive protein （CRP） and interleukin （IL）-6 were determined by enzyme linked immunosorbent assay. Histopathological changes of the wound were observed by hematoxylin-eosin staining. Immunohistochemical staining was used to measure the microvascular density of rat wound tissue. The protein expression levels of PI3K， phosphorylated PI3K （p-PI3K）， AKT， phosphorylated AKT （p-AKT）， NF-κB p65， phosphorylated NF-κB p65 （p-NF-κB p65） and NF-κB inhibitory protein α （IκB-α） in rat wound tissue were determined by Western blot assay. Results Rats in the control group had smooth hair color， normal diet， drinking water and excretion， more active， wound healing fast， less inflammatory reaction in wound tissue， and there were more new blood vessels. Fibroblasts and collagen matrix were abundant in granulation tissue. In the model group， the fur color of rats was dull and matte， and the activity was reduced. The symptoms of polydipsia， polyphagia and polyuria were appeared in the model group， the wound color was dark， and edema and ulcer appeared in the surrounding tissue， a large number of inflammatory cells infiltrated in the wound tissue， accompanied by tissue necrosis and exudation， fewer neovascularization and fibroblasts were observed. Wound healing rate， TcpO2 in wound surrounding tissue， serum VEGF， HIF-1α， microvascular density， p-PI3K， p-AKT and IκB-α protein expression levels in wound tissue were decreased， and FBG， serum CRP， IL-6， p-NF-κB p65 protein expression in wound tissue were increased （P＜0.05）. Compared with the model group， the state of rats was gradually improved in the Huangqi Yanghe Decoction low and high dose groups， and the lesion degree of wound tissue was reduced successively， wound healing rate， TcpO2 in wound surrounding tissue， serum VEGF， HIF-1α， microvascular density， p-PI3K， p-AKT and IκB-α protein expression levels in wound tissue were increased in turn （P＜0.05）. The FBG， serum CRP， IL-6 and p-NF-κB p65 protein expression in wound tissue were decreased in turn （P＜0.05）. LY294002 could partially reverse the therapeutic effect of high-dose Huangqi Yanghe Decoction on DFU rats （P＜0.05）. Conclusion Huangqi Yanghe Decoction can regulate PI3K/AKT/NF-κB pathway， inhibit inflammatory response in DFU rats， promote angiogenesis and thus promote wound healing.

Key words： Huangqi Yanghe Decoction; diabetic foot ulcer; wound healing; phosphatidylinositol 3-kinase; protein kinase B; nuclear factor-κB

糖尿病足（DF）是糖尿病的常見并發癥，為下肢遠端血管病變合并神經病變，進一步形成足部感染、潰瘍，稱為糖尿病足潰瘍（DFU）［1］。DFU是患者截肢和長期住院的重要原因，糖尿病患者高位截肢發生風險較非糖尿病患者高10～30倍，且截肢后的5年病死率為39%～68%［2-3］。DFU的病理過程非常復雜，涉及受損的皮膚、肌肉、肌腱、骨骼、神經和血管，并伴有持續的高血糖狀態［4］，這使DFU較正常傷口難以愈合，且治療費用高，長期創面存在會導致原病情加重。目前DFU的治療方法主要包括控制血糖、抗感染、外科清創術和外用生長因子［5］，但治療效果并不理想。需要不斷研究促進DFU疾病治愈的新方法以降低致殘率和病死率。有研究表明，中國傳統醫藥在治療糖尿病及其相關并發癥方面有顯著的作用［6］。陽和湯出自清代王洪緒《外科證治全生集》，臨床上被廣泛應用于治療DFU［7］、下肢血管病變［8］；且研究發現其可加速創面愈合，結合負壓技術能夠縮短DF患者創面愈合時間，臨床療效明顯［9］。黃芪及以黃芪為主藥的方劑可明顯促進創面愈合，降低高血糖，有效提升早期DF的治療效果［10-11］。因此，本研究以陽和湯為主方，加入生黃芪，簡稱黃芪陽和湯。通過構建DFU大鼠模型，探究黃芪陽和湯對DFU大鼠創面愈合的影響及可能的作用機制，為黃芪陽和湯的臨床應用提供實驗參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 SPF級雄性SD大鼠，10周齡，體質量353～379 g，購自湖北綠雪生物產業有限公司，動物生產許可證號：SCXK（鄂）2022-0015。將所有大鼠放在可控制的光照下保持12 h明暗交替，溫度22～26 ℃，相對濕度為45%～60%，可以自由獲取食物和水。本實驗經張家口學院倫理委員會批準（批準號：ZJKXY倫審2022-113）。

1.1.2 藥物與試劑 黃芪陽和湯［組方：熟地50 g、肉桂5 g（去皮，研粉）、麻黃3 g、鹿角膠15 g、白芥子10 g、姜炭3 g、生甘草5 g、生黃芪100 g］，以上中藥均購自河北豪通中藥飲片有限公司，加水500 mL煎煮1 h，過濾藥液；再加水500 mL繼續煎煮1 h，過濾第2次的藥液；將2次的藥液合并，經旋轉蒸發儀濃縮成生藥質量濃度為0.85 g/mL、1.7 g/mL的藥液。鏈脲佐菌素（STZ）、PI3K/AKT通路抑制劑（LY294002）、HE染色試劑盒、山羊血清、BCA試劑盒、ECL試劑均購自武漢科前生物技術有限公司；血管內皮生長因子（VEGF）、缺氧誘導因子-1α（HIF-1α）、C反應蛋白（CRP）、白細胞介素（IL）-6酶聯免疫吸附試驗（ELISA）試劑盒，蛋白裂解液均購自深圳紐邦生物技術有限公司；兔抗大鼠CD31一抗，羊抗兔二抗，鼠源磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、磷酸化PI3K（p-PI3K）、蛋白激酶B（AKT）、磷酸化AKT（p-AKT）、核因子-κB p65（NF-κB p65）、磷酸化NF-κB p65（p-NF-κB p65）、NF-κB抑制蛋白α（IκB-α）、β-肌動蛋白（β-actin）一抗，羊抗鼠二抗均購自濟南思科生物科技有限公司。

1.1.3 儀器 血糖儀（型號Accu-Chek Active）、酶標儀（型號iMark680）、熒光顯微鏡（型號IX73）均購自天津科德生物技術有限公司；經皮氧分壓監測儀（型號PeriFlux 5000）、凝膠成像系統（型號OmegaLum C）均購自廣州威佳科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 模型的建立及分組給藥 構建DFU大鼠模型［12］：大鼠喂養高脂高糖飼料（含66.5%基礎飼料+10%豬油+20%蔗糖+ 2.5%膽固醇+1%膽酸鈉），4周后，一次性腹腔注射STZ 60 mg/kg（注射前大鼠禁食12 h），3 d后尾尖處取血檢測空腹血糖（FBG），若FBG＞16.7 mmol/L，且大鼠出現多食、多飲、多尿的表現，即為糖尿病大鼠建模成功。隨后麻醉大鼠，脫去右后足背部毛發，碘伏消毒，切除足背全層皮膚，創建5 mm×? ?2 mm的矩形全層傷口，完成DFU大鼠造模［12］。將造模成功的48只大鼠按照隨機數字表法分為模型組，黃芪陽和湯低（8.5 g/kg）、高（17 g/kg）劑量組，黃芪陽和湯高劑量（17 g/kg）＋LY294002（0.3 mg/kg）組［13］，每組12只。另取12只健康大鼠作為對照組，以普通飼料喂養，使用等量生理鹽水代替STZ腹腔注射，以上述方式創建足背傷口。

給藥劑量換算：黃芪陽和湯根據臨床給藥劑量（70 kg成人給藥劑量191 g），按種屬間體表面積換算，大鼠對應給藥劑量為成人的6.3倍，換算大鼠等效劑量約為17 g/kg，因此，設置黃芪陽和湯低、高劑量為8.5、17 g/kg。

建模后，對照組、模型組大鼠不進行藥物干預，灌胃蒸餾水早晚各1次；黃芪陽和湯低、高劑量組大鼠每天分別給予8.5、17 g/kg的黃芪陽和湯灌胃給藥（生藥含量為0.85、1.7 g/mL的藥液，灌胃體積10 mL/kg），早、晚各1次；黃芪陽和湯高劑量＋LY294002組大鼠每天給予17 g/kg的黃芪陽和湯灌胃給藥（灌胃體積10 mL/kg），早晚各1次，同時腹腔注射0.3 mg/kg的LY294002，每日注射1次。各組連續給藥4周。

1.2.2 大鼠一般狀態和傷口愈合情況觀察 實驗期間觀察大鼠一般狀態及創面變化，并于第14、28天給藥后使用數碼相機拍照，記錄傷口創面的愈合情況，并通過Image-Pro Plus 6.0軟件分析潰瘍區域面積。計算大鼠創面愈合率，創面愈合率（%）=（1-給藥后潰瘍區域面積/給藥前潰瘍區域面積）×100%。

1.2.3 大鼠FBG水平的檢測 在第14、28天給藥后，采集大鼠尾靜脈血，采用血糖儀測量大鼠FBG水平。

1.2.4 大鼠創面周圍組織經皮氧分壓（TcpO2）的檢測 于第14、28天給藥后，采用TcpO2監測系統檢測大鼠創面周圍組織TcpO2。大鼠腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉后，將創面周圍毛發剃去，清洗干凈，將TcpO2探頭固定在大鼠創面周圍皮膚上（不漏氣），放置電極，連續監測15 min。待TcpO2穩定后，讀數并記錄監測數值。

1.2.5 大鼠血清生長因子（VEGF、HIF-1α）和炎性因子（CRP、IL-6）的檢測 末次給藥結束24 h后，腹主動脈取血3 mL，靜置后以4 700 r/min離心17 min，取上清液，按照ELISA試劑盒說明書檢測血清中VEGF、HIF-1α、CRP、IL-6水平。

1.2.6 大鼠創面組織病理學變化的檢測 取血完成后，頸椎脫臼處死大鼠，取大鼠創面及周圍3 mm組織，并將其分為2份，1份于-80 ℃冰箱中保存；另外1份固定于4%多聚甲醛溶液中，石蠟包埋，4 ?m厚度切片；取部分切片HE染色，在顯微鏡下觀察表皮再生、肉芽組織形成和炎性細胞浸潤情況。

1.2.7 免疫熒光染色測定創面組織微血管密度 使用兔抗大鼠CD31一抗進行免疫熒光染色，分析創面組織微血管密度。取1.2.6中的切片，在3%正常山羊血清中封閉，然后與兔抗大鼠CD31一抗在4 ℃孵育24 h，洗去一抗，滴加羊抗兔二抗（1∶200），室溫下孵育1 h，洗去二抗，甘油封片，熒光顯微鏡下觀察并計算創面周圍組織微血管密度（微血管被染成紅色），微血管密度=微血管染色面積/視野區域面積×100%，用Image J軟件定量分析。每張切片觀察5個區域，取平均值。

1.2.8 Western blot檢測大鼠創面組織中PI3K/AKT/NF-κB信號通路相關蛋白的表達 取1.2.6中-80 ℃保存的大鼠創面組織，解凍后研磨勻漿，蛋白裂解液裂解，BCA法進行蛋白定量。取等量蛋白樣品上樣（30 μg），凝膠電泳分離，濕轉法轉膜，5%脫脂奶粉封閉1 h，然后在4 ℃下與稀釋比例為1∶1 450的鼠源PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、NF-κB p65、p-NF-κB p65、IκB-α、β-actin一抗孵育過夜。TBST洗滌，加稀釋比例為1∶2 200的羊抗鼠二抗在室溫下孵育2 h。ECL顯色，分析膜上蛋白質表達水平。

1.3 統計學方法 采用SPSS 24.0軟件進行數據分析。計量資料以均數±標準差（[x] ±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間多重比較行SNK-q檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 黃芪陽和湯對DFU大鼠一般狀態和創面愈合的影響 對照組大鼠毛色光滑，飲食、飲水、排泄均正常，較活躍，創面愈合快；與對照組相比，模型組大鼠毛色暗淡無光澤，活動減少，且出現多飲、多食、多尿癥狀，創面顏色較深，周圍組織出現水腫、潰瘍，第14、28天給藥后創面愈合率降低（P＜0.05）；與模型組相比，黃芪陽和湯低、高劑量組大鼠狀態逐漸改善，第14、28天給藥后創面愈合率依次升高（P＜0.05）；與黃芪陽和湯高劑量組相比，黃芪陽和湯高劑量＋LY294002組大鼠第14、28天給藥后創面愈合率降低（P＜0.05）。見圖1、表1。

2.2 各組大鼠FBG水平變化 與對照組相比，模型組大鼠第14、28天給藥后FBG水平升高（P＜0.05）；與模型組相比，黃芪陽和湯低、高劑量組大鼠第14、28天給藥后FBG水平依次降低（P＜0.05）；與黃芪陽和湯高劑量組相比，黃芪陽和湯高劑量＋LY294002組大鼠第14、28天給藥后FBG水平升高（P＜0.05）。見表2。

2.3 各組大鼠創面周圍組織TcpO2比較 與對照組相比，模型組大鼠第14、28天給藥后創面周圍組織TcpO2降低（P＜0.05）；與模型組相比，黃芪陽和湯低、高劑量組大鼠第14、28天給藥后創面周圍組織TcpO2依次升高（P＜0.05）；與黃芪陽和湯高劑量組相比，黃芪陽和湯高劑量＋LY294002組大鼠第14、28天給藥后創面周圍組織TcpO2降低（P＜0.05）。見表3。

2.4 各組大鼠血清VEGF、HIF-1α、CRP、IL-6水平比較 與對照組相比，模型組大鼠血清VEGF、HIF-1α水平降低，CRP、IL-6水平升高（P＜0.05）；與模型組相比，黃芪陽和湯低、高劑量組大鼠血清VEGF、HIF-1α水平依次升高，CRP、IL-6水平依次降低（P＜0.05）；與黃芪陽和湯高劑量組相比，黃芪陽和湯高劑量＋LY294002組血清VEGF、HIF-1α水平降低，CRP、IL-6水平升高（P＜0.05）。見表4。

2.5 各組大鼠創面組織病理學變化 對照組大鼠創面組織炎癥反應較輕，新生血管較多，肉芽組織中成纖維細胞及膠原基質豐富；模型組大鼠創面組織可見大量炎性細胞浸潤，伴組織壞死、滲出，新生血管及成纖維細胞較少；與模型組相比，黃芪陽和湯低、高劑量組大鼠創面炎性細胞減少，肉芽下方新生血管旺盛；與黃芪陽和湯高劑量組相比，黃芪陽和湯高劑量＋LY294002組大鼠創面組織炎性細胞增多，成纖維細胞及新生血管減少。見圖2。

2.6 各組大鼠創面組織微血管密度比較 對照組、模型組、黃芪陽和湯低劑量組、黃芪陽和湯高劑量組、黃芪陽和湯高劑量＋LY294002組大鼠創面組織微血管密度分別為（34.92±5.45）%、（10.15±1.91）%、（18.24±3.15）%、（30.31±4.48）%、（20.09±3.06）%，組間比較差異有統計學意義（n=12，F=80.757，P＜0.01）。與對照組相比，模型組大鼠創面組織微血管密度降低（P＜0.05）；與模型組相比，黃芪陽和湯低、高劑量組大鼠創面組織微血管密度依次升高（P＜0.05）；與黃芪陽和湯高劑量組相比，黃芪陽和湯高劑量＋LY294002組大鼠創面組織微血管密度降低（P＜0.05）。見圖3。

2.7 各組大鼠創面組織PI3K/AKT/NF-κB信號通路相關蛋白表達變化 與對照組相比，模型組大鼠創面組織p-PI3K、p-AKT、IκB-α蛋白表達水平降低，p-NF-κB p65蛋白表達升高（P＜0.05）；與模型組相比，黃芪陽和湯低、高劑量組大鼠創面組織p-PI3K、p-AKT、IκB-α蛋白表達水平依次升高，p-NF-κB p65蛋白表達依次降低（P＜0.05）；與黃芪陽和湯高劑量組相比，黃芪陽和湯高劑量＋LY294002組大鼠創面組織p-PI3K、p-AKT、IκB-α蛋白表達水平降低，p-NF-κB p65蛋白表達升高（P＜0.05）。見圖4、表5。

3 討論

中醫認為DFU屬于“脫疽”范疇，其發病機制為陰陽俱虛、氣陰兩虛、血脈瘀阻。而腎主骨、生髓，腎陽不足則缺少溫煦生發之力，導致寒阻血凝，血液運行不暢［14］。因此，可從補腎、益氣、溫陽、活血角度出發尋找DFU的治療方法。

陽和湯具有溫陽散寒、補血通滯的功效，方中熟地可滋陰補血，鹿角膠溫陽補腎，肉桂、姜炭可溫通血脈，麻黃散寒通絡，白芥子驅寒通滯。已有研究表明，陽和湯治療DFU效果顯著，可明顯縮短創面愈合時間［9］。本研究所用黃芪陽和湯是在陽和湯的基礎上加黃芪以增加其益氣排膿的功效，而且黃芪在臨床上也被廣泛用于糖尿病及其并發癥的治療［15］。TcpO2可用于評估糖尿病周圍血管病變的狀況，可以有效反映下肢動脈病變所致的微循環狀態，具有敏感度和特異度高，檢測方便、經濟、可靠、重復性好等優點，目前已有研究應用TcpO2預測DFU潰瘍愈合情況［16］。本研究結果顯示，DFU大鼠一般狀態較差，創面組織病理損傷嚴重，創面愈合率、創面周圍組織TcpO2較健康大鼠降低，FBG水平較健康大鼠升高，表明DFU模型建立成功；而經黃芪陽和湯治療后，大鼠一般狀態好轉，創面組織病變程度減輕，且創面愈合率、創面周圍組織TcpO2升高，FBG降低，且劑量越高效果越好，提示黃芪陽和湯用于治療DFU可發揮降血糖、促進創面愈合的作用。黃芪陽和湯組方中麻黃、甘草、黃芪等中藥及其主要成分均被報道有降血糖作用［17-19］，推測其降糖作用可能與方中的一些中藥或活性成分有關，究竟是何種成分發揮降血糖作用及其機制尚待進一步研究。

高血糖通過升高促炎細胞因子水平和降低生長因子水平，并通過減少血液循環及傷口中的細胞增殖、遷移延遲創面愈合［20］。血管生成是傷口愈合過程中必不可少的部分。研究表明高糖可誘導內皮細胞損傷，抑制血管生成和傷口愈合，而促進血管生成可加速糖尿病大鼠的傷口愈合［21］。本研究結果顯示，DFU大鼠創面組織微血管密度較低，而黃芪陽和湯干預后，大鼠創面組織微血管密度升高。HE染色亦顯示黃芪陽和湯可減少炎性細胞浸潤，促進肉芽組織形成、成纖維細胞增殖和血管生成，加速傷口愈合。CRP是糖尿病及大血管病變的危險因子，DF創面愈合緩慢與CRP、IL-6過高表達有關［22］。HIF-1α可調節細胞內的氧代謝，是唯一能在缺氧狀態下發揮活性的轉錄因子；VEGF是HIF-1α的下游基因，可特異性地促進血管內皮細胞生長及血管新生，有利于血管內皮細胞的增殖［23］。本研究結果顯示，黃芪陽和湯可降低血清炎性因子CRP、IL-6水平，升高生長因子VEGF、HIF-1α水平，提示黃芪陽和湯可抑制局部組織炎癥反應，促進血管生成并增加血液運輸氧氣的功能，進而加速DFU大鼠創面愈合。

PI3K/AKT和NF-κB信號在炎癥及血管生成中起關鍵作用。LY294002為PI3K/AKT通路的阻斷劑，可抑制PI3K磷酸化，阻斷PI3K/AKT通路影響血管生成。PI3K是PI3K/AKT/NF-κB通路的上游啟動子，在生長因子刺激下可進一步激活AKT，促進內皮細胞的增殖、遷移，進而產生新的微血管［24］。研究表明，PI3K/AKT通路在糖尿病中會受到抑制，激活PI3K/AKT通路可促進血管新生，從而促進傷口愈合［25］。NF-κB是涉及先天免疫和炎癥反應的多效調節劑，可調節炎性因子的分泌，抑制PI3K/AKT通路可導致NF-κB抑制性蛋白IκBα表達下調，促進NF-κB磷酸化，進而調節促炎因子的表達［26］。本研究結果顯示，黃芪陽和湯可升高DFU大鼠創面組織中p-PI3K、p-AKT、IκB-α蛋白表達水平，降低p-NF-κB p65蛋白表達，提示黃芪陽和湯可激活PI3K/AKT通路，抑制NF-κB的活化。為了進一步驗證黃芪陽和湯的作用機制，本研究在高劑量黃芪陽和湯干預的基礎上使用LY294002來抑制PI3K/AKT通路的激活，結果顯示，LY294002可部分逆轉高劑量黃芪陽和湯對DFU大鼠的治療效果，提示黃芪陽和湯對DFU大鼠創面愈合的促進作用可能與激活PI3K/AKT通路，抑制NF-κB的活化，進而降低炎癥反應，促進血管新生有關。但黃芪陽和湯能否通過其他信號通路起作用還有待后續研究。

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（2023-04-23收稿 2023-07-13修回）

（本文編輯 陳麗潔）