外周血CTC、PD-L1 及S100A6BP 水平對胃癌患者診斷及預后價值

徐毅 唐巖 李冬揚

胃癌是原發于胃黏膜上皮細胞的常見消化系統惡性腫瘤，流行病學調查顯示，2020 年胃癌發病率及死亡率高居全球癌癥第5 位及第4 位，中國胃癌發病率及死亡率高于全球平均水平［1］。胃癌早期臨床癥狀不具有典型性，大部分患者確診是已經處于中晚期，往往出現深度浸潤、淋巴管轉移、腹腔種植等遠處轉移，錯過最佳治療時間而導致患者預后不良［2］，胃癌早期診斷及治療對提高患者生存率至關重要。目前臨床以胃鏡活檢作為臨床診斷胃癌的金標準，但該方法具有創傷性，部分患者耐受性較低，更方便、準確的輔助診斷方法是國內外關注的持續關注的重點。循環腫瘤細胞（circulating tumor cell，CTC），是由腫瘤病灶脫落進入血液循環的腫瘤細胞，是引起腫瘤復發及轉移的重要因素。程序性死亡因子配體-1（Programmed deathligand-1，PD-L1）是下調患者免疫功能的關鍵分子，在腫瘤免疫逃逸機制中發揮重要作用。鈣周期素結合蛋白（calcyclin binding protein，S100A6BP）是一種多配體蛋白，通過與不同因子相互參與細胞骨架重組、增殖、分化以及蛋白質泛素化等過程［3］。本研究探討外周血CTC、PD-L1 及S100A6BP 水平在胃癌患者診斷及預后預測中的應用價值，具體報道如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取南陽市第一人民醫院在2020 年5 月至2022 年5 月收治的182 例胃癌患者為觀察組，其中男98 例，女94 例，年齡平均（48.34±4.97）歲。根據TNM 胃癌腫瘤分期［4］：Ⅰ期38 例，Ⅱ期41 例，Ⅲ期77 例，Ⅳ期26 例；根據組織學分化程度［5］：低分化98 例，中高分化84 例。選取同期90 名健康志愿者作為對照組，其中男47 例，女43 例，年齡平均（47.78±4.35）歲。兩組一般資料比較差異無統計學意義（P＞0.05）。

納入標準：①符合《胃癌規范化診療指南》中胃癌相關診斷標準［6］，經組織病理學、影像學、生物標志物檢測等綜合臨床診斷確診為胃癌患者；②未接受手術、放化療、免疫治療等其他相關抗癌治療；③首次確診為胃癌，無合并其他癌癥；④臨床資料完整，患者及家屬知情并簽署知情同意書。排除標準：①合并嚴重的心腦血管疾病，重要器官功能障礙；②自身免疫性疾病、嚴重的感染性疾病、多發腫瘤；③術中或術后淋巴結組織樣本檢測提示陽性或證實存在遠處轉移；④精神障礙、認知功能異常者。本研究經本院倫理委員會審批通過。

1.2 方法

PD-L1、S100A6BP 檢測方法：采用酶聯免疫吸附法檢測。兩組受試者清晨空腹采集外周靜脈血5 mL，以離心半徑10 cm，轉速3 500 r/min，離心10 min 后取上清液。PD-L1 試劑盒購自賽默飛世爾科技公司，貨號：BMS2327；S100A6BP 試劑盒購自美國Novus 公司，貨號：NBP2-74962。

CTC 檢測方法：兩組受試者清晨采集外周靜脈血5 mL，加入樣本密度分離液（可榮生物有限公司，貨號：KMQ0141）以離心半徑15 cm，轉速1 500 r/min，離心15 min，取單核細胞層，并采用微流控芯片分離技術富集腫瘤細胞，將富集所得細胞涂片在載玻片上，加入CD45 白細胞探針、CK 上皮型RNA 探針及DAPI 細胞核染液進行免疫熒光染色，采用熒光顯微鏡進行觀察。CTC 陽性標準［7］：免疫熒光檢測DAPI 染色明亮，出現核偏位、巨大核仁或異常核分裂，核質比＞0.8，CK（+）、CD45（-），則判讀為CTC。統計CTC 陽性率并根據五點取樣法對熒光顯微鏡視野下CTC進行計數。

對胃癌患者進行為期1 年隨訪調查，根據實體瘤療效評價標準［8］分為預后良好組（疾病緩解，病情穩定，無復發、轉移或死亡）及預后不良組（疾病進展，死亡）

1.3 統計學方法

采用SPSS 23.0 對數據進行統計分析。計量資料以（）表示，兩組比較用t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析；計數資料用n（%）表示，行χ2檢驗，多因素使用Logistic 回歸分析，并采用受試者工作特征（ROC）曲線分析外周血CTC、PD-L1及S100A6BP 水平及三者聯合檢測在胃癌患者預后預測效能。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組CTC、PD-L1 及S100A6BP 水平比較

觀察組CTC、PD-L1 及S100A6BP 水平均高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 兩組CTC、PD-L1 及S100A6BP 水平比較（）Table 1 Comparison of CTC，PD-L1 and S100A6BP levels between the two groups（）

表1 兩組CTC、PD-L1 及S100A6BP 水平比較（）Table 1 Comparison of CTC，PD-L1 and S100A6BP levels between the two groups（）

2.2 CTC、PD-L1 及S100A6BP 水平對胃癌患者的診斷效能分析

CTC、PD-L1 及S100A6BP 三者聯合檢測靈敏度為94.35%，特異度為95.79%，均較單一檢測高（P＜0.05）。見表2。

表2 CTC、PD-L1 及S100A6BP 水平對胃癌患者的診斷效能分析Table 2 Diagnostic efficacy analysis of CTC，PD-L1 and S100A6BP levels in patients with gastric cancer

2.3 影響胃癌患者預后單因素分析

182 例胃癌患者中，預后良好者124 例，預后不良者58 例。預后良好者腫瘤直徑、TNM（Ⅲ～Ⅳ）、中高分化、淋巴結轉移、浸潤深度（T3-T4）、CTC、PD-L1 及S100A6BP 水平均較預后不良組低，TNM（Ⅰ～Ⅱ）、低度分化、浸潤深度（T1-T2）水平較預后不良組高（P＜0.05）。見表3。

表3 影響胃癌患者預后單因素分析［（），n（%）］Table 3 Analysis of single factors affecting prognosis of patients with gastric cancer［（），n（%）］

表3 影響胃癌患者預后單因素分析［（），n（%）］Table 3 Analysis of single factors affecting prognosis of patients with gastric cancer［（），n（%）］

2.4 影響胃癌患者預后Logistic 多因素分析

多因素Logistic 回歸分析顯示，腫瘤直徑、TNM 分期、分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移、CTC、PD-L1、S100A6BP 是影響胃癌預后不良的獨立危險因素（P＜0.05）。見表4。

表4 影響胃癌患者預后Logistic 多因素分析Table 4 Logistic analysis of multiple factors affecting prognosis of patients with gastric cancer

2.5 CTC、PD-L1 及S100A6BP 水平單一及聯合檢測對胃癌患者預后預測效能

CTC、PD-L1 及S100A6BP 聯合檢測特異度、靈敏度較單一檢測高，CTC、PD-L1、S100A6BP 單一及聯合檢測AUC 分別為0.808、0.845、0.874、0.955（P＜0.05）。見表5、圖1。

圖1 CTC、PD-L1 及S100A6BP 水平單一及聯合檢測對胃癌患者預后預測效能Figure 1 Predictive efficacy of single and combined detection of CTC，PD-L1 and S100A6BP in patients with gastric cancer

表5 CTC、PD-L1 及S100A6BP 水平單一及聯合檢測對胃癌患者預后預測效能Table 5 Prognostic efficacy of single and combined detection of CTC，PD-L1 and S100A6BP in patients with gastric cancer

3 討論

胃癌是由多種因素引起常見消化系統惡性腫瘤，家族史、不良的生活習慣、幽門螺桿菌、EB 病毒感染等均會增加胃癌的發生率。目前臨床治療胃癌的主要方法包括手術切除、輔助化療、免疫治療、靶向治療等，但臨床上胃癌的死亡率高、預后較差。對胃癌早期的識別及診斷、分析影響其預后的因素、提高患者生存情況一直是臨床探索研究的重要內容［9］。液體活檢代表了一種新興腫瘤監測方法，通過檢測微小殘留量來獲得腫瘤的分子信息，包括CTC、循環腫瘤DNA、外泌體、非編碼RNA、蛋白質及細胞因子等，對疾病進行識別和診斷，識別治療靶點、評估腫瘤耐藥性、預測治療反應，在腫瘤早期診斷、用藥指導與耐藥機制探索、治療效果的實時監測，預后預測及風險分級中發揮了巨大的價值［10］。

外周血是液體活檢廣泛應用的生物體液樣本，本研究結果顯示，胃癌患者外周血CTC、PD-L1及S100A6BP 水平均較健康受試者高。正常胃粘膜上皮細胞排列緊密、移動性較差，極少出現外周血的遠處轉移，且由于免疫系統的攻擊、高剪切應激及氧化應激，CTC 難以在脈管系統中生存［11］。胃癌患者細胞形態和遷移能力改變，發生上皮間質轉化，通過侵襲轉移進入血液循環，成為CTC，腫瘤微循環環境中轉化生長因子β 表達量增加，誘導凝血功能增強，使CTC 周圍形成血小板微凝塊，從而保護CTC 免受脈管系統中的高剪切應力，使胃癌患者微循環中CTC 含量增加。因此胃癌患者外周血CTC 水平升高，與Kang 等研究結論相符［12］。PD-L1 是腫瘤免疫逃逸機制的中的關鍵因子，在腫瘤的發生和發展中起重要作用。PD-L1 通過下調轉錄因子BATF 表達，抑制效用T 細胞分化，并造成T 細胞胞質磷酸化，抑制T 細胞功能。PD-L1T 細胞上的受體程序性死亡因子-1（PD-1）相互作用，抑制T 細胞功能及腫瘤浸潤相關淋巴細胞的增值和活化，抑制機體免疫應答。胃癌細胞過表達PD-L1，并且由于免疫逃逸機制不會被T 細胞清除，導致外周血PD-L1 水平升高。與馬曉玲等研究結果相符［13］。S100A6BP 是S100A6 蛋白家族的成員之一，最初是從埃利希腹水腫瘤細胞中分離出來。S100A6BP 參與細胞分化，應激反應以及細胞骨架動力學，S100A6BP 在胃癌的發生和發展中研究較少，但其主要功能與細胞增殖及腫瘤發生有關［14］。S100A6BP 表達上調受腫瘤壞死因子、胃泌素等細胞因子影響，胃癌患者機體處于炎癥及應激狀態下促進S100A6BP 表達增加。與孟猛等研究結果相符［15］。因此胃癌患者外周血CTC、PD-L1 及S100A6BP 水平呈高表達狀態，對胃癌的診斷具有重要意義。CTC、PD-L1 及S100A6BP 在癌細胞的遷移和侵襲中發揮關鍵作用，與胃癌的遠處遷移和病情發展相關。胃癌中S100A6BP 的過表達與腫瘤較大、浸潤更深有關，是腫瘤化療療效的預測生物標志物［16］?？梢苑磻赴┑膰乐爻潭?，與胃癌預后不良有關。PD-1/PD-L1 信號通路可以調節腫瘤細胞的增殖、凋亡、遷移和侵襲，是主要的免疫檢查點之一。PD-L1 表達升高預示著治療預后不佳，而通過阻斷PD-1/PD-L1 信號通路，下調PD-L1 水平可以增強T 細胞介導的免疫應答系統，抑制癌細胞的增殖、遷移、侵襲，改善胃癌患者預后［17］。CTC 作為轉移性生長的標志物，是胃癌遷移和復發的關鍵因素。CTC 上皮間質轉化過程可以激活Akt 和P13k 信號通路，抑制細胞凋亡，促進腫瘤的侵襲和轉移。因此外周血CTC 水平升高是胃癌轉移的重要預測因素。

綜上所述，外周血CTC、PD-L1 及S100A6BP水平在胃癌的發生、發展的起到關鍵作用，通過對CTC、PD-L1、S100A6BP 的監測可以對胃癌的診斷、個體化治療及預后判斷和風險評估具有重要意義。