規?；i場豬圓環病毒3型的檢疫及防控

方 勇

安徽省黃山市祁門縣農業綜合行政執法大隊,安徽 祁門 245600

0 引言

隨著養豬業的發展以及規?；B殖的普及,豬群中病毒病的發生率也逐漸增加,對養豬業和獸醫衛生工作帶來了較大的挑戰。其中豬圓環病毒3型(porcine circovirus type 3,PCV3)是一種新型病毒,近年來在全球范圍內不斷發生,并廣泛感染家豬。PCV3病毒是一種DNA病毒,對豬的免疫系統和器官組織均有影響,表現為呼吸道和泌尿生殖系統疾病,其主要病征為出現瘀斑,嚴重時可使染病豬群死亡率高達50%。因此,對PCV3病毒進行精準檢疫和有效控制,對于保障養豬業的發展和豬群健康至關重要。本文詳細介紹了規?；i場中PCV3病毒檢疫方法,包括血清學檢測、RT-PCR和測序技術及其優缺點;提出了規?；i場管理和控制該病毒的建議,包括加強衛生管理、建立監測體系,加強病源追溯等多方面措施。這些措施可以減小PCV3病毒對豬群健康的影響,提高豬群產能并保障養豬業的可持續發展。

1 PCV3病毒性質及其危害

PCV3病毒是一種DNA病毒,屬于圓環病毒科,是近年來才被發現的一種新型病毒[1]。

PCV3病毒是一種嚴重的病原體,對豬的健康和生產都有較大的影響。它可以引起豬的多種疾病,包括肉眼可見的皮膚、內臟、神經、泌尿生殖、循環和免疫系統損害等。PCV3病毒可引起瘀斑、水泡、結塊、水腫等不同嚴重程度的皮膚病變,尤其是在不注意通風的高密度飼養環境中更容易出現。如果發病程度較輕,會影響豬部分皮膚的光澤度和外觀整體程度。如果發病程度過重,瘀斑將會產生大量的氣體,這些氣體對于豬的健康也具有威脅性。PCV3病毒還會對豬的內臟器官造成損害,例如感染肝膿腫、淋巴結炎、肺炎等疾病。由于內臟器官是豬的核心體征之一,此類感染容易使豬免疫系統功能下降,影響豬的生長發育和繁殖能力。PCV3病毒感染后,可引起豬的神經系統受損,出現疼痛、畏寒、癱瘓等現象。在疫情高發期,神經系統受損的豬更易長時間處于十分危險的狀態,如果沒有及時進行診療,極易出現死亡[2]。PCV3病毒感染后,也會對豬的免疫系統和循環系統造成影響。

2 規?；i場中PCV3病毒檢疫方法

2.1 血清學檢測

血清學檢測是一種常用的間接檢測PCV3病毒感染的方法。該方法主要通過檢測豬血清中的抗體反應來判斷豬是否感染了PCV3病毒。血清學檢測快速、簡便、經濟,適用于大規模群體中的PCV3病毒檢測工作。血清學檢測主要包括酶聯免疫吸附試驗法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和凝集試驗法(SN)2種方法。ELISA法是常用的檢測血清樣品中PCV3病毒抗體的方法。這種方法相比其他檢測方法具有簡單、快速、經濟等優勢,適用于高通量、高效率的大規模豬場中PCV3病毒檢測。ELISA法主要分為間接ELISA法和競爭ELISA法2種。間接ELISA法是采用PCV3病毒封閉抗原固定在微孔板上,然后在經過適當濃度的豬血清樣品中進行血清樣品的抗原-抗體反應,再用特定的二抗檢測豬抗體-IgG或-IgM特異性的結合蛋白,以多克隆抗體標記辣根過氧化物酶(HRP-I)。血清標本中的PCV3病毒抗體可以與固定的抗原結合,結合antibo固定在微孔板中,一旦受到特異性HRP抗體的檢測,樣本就會顯現出HRP顏色反應。此時通過測定反應物和底物的顏色強度即可確定血清中的抗體消耗情況,從而判斷豬是否感染PCV3病毒。

競爭ELISA法旨在檢測豬血清中的特異性IgG抗體。在ELISA法中,在線性范圍內添加標準化PCV3抗原和待檢測樣板血清,神經投放特異性抗體標記的酶標記IgG。此時,當血清樣品中存在特異性IgG抗體時,它將會和已經在板中固定的PCV3抗原競爭IgG酶標記結合。

2.2 RT-PCR檢測

反轉錄聚合酶鏈式反應(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)檢測是目前最為常用的直接檢測PCV3病毒的方法之一。RT-PCR技術主要通過從豬組織或血清樣品中提取病毒RNA/DNA,使用PCR擴增技術對其進行檢測。這種方法具有靈敏度高、特異性好、反應迅速等優點,在PCV3病毒檢測中有著廣泛的應用。樣品處理是RT-PCR檢測的第1步,主要包括樣品的收集和處理。首先,需要選擇合適的樣品,其中豬血清是最為常見的樣品類型之一。此外,還可以選擇從肺、肝、脾等組織中提取RNA/DNA作為樣品,從而檢測病原體的存在與否。在樣品處理過程中,需要遵循規范的樣品處理流程,以確保樣品質量符合要求。RNA/DNA提取是RT-PCR檢測的關鍵步驟。在提取過程中,可以使用各種提取試劑盒或基因組提取儀進行,一般而言,RNA提取的方法比DNA提取的方法更加繁瑣。分析結果是RT-PCR檢測的最后一步。在進行RT-PCR擴增后,需要對擴增產物進行測定和分析[3]。

2.3 測序技術

測序技術是檢測PCV3病毒的重要方法之一,它用于解析病毒的DNA或RNA序列,分析病毒的類型、特點和變異,有助于了解病毒的生物學特性,為病毒疫苗研發、藥物研發提供重要數據。 測序技術主要分為3個步驟:PCR擴增、純化、測序。PCR擴增是測序技術中最核心的一步,它主要是通過酶的功能,在特定的條件下,從病毒樣本中放大特定區域的DNA或RNA片段。在PCR擴增過程中,需要使用特異性的引物和其他試劑,引物需要特異性好、較長,并且具有一定的范圍性,從而可以擴增出所需要的DNA或RNA片段。通過PCR擴增得到DNA或RNA片段后,當需要進行測序時,應對PCR產物進行純化處理,以去除其他雜質,確保樣品純度,從而得到可靠性高的測序數據。純化方法包括凝膠切割、基于柱的純化等。PCR產物純化后,可采用測序方法進行病毒儲存庫測序,隨后通過測序儀對經過純化處理的PCR獲得的DNA或RNA片段進行測序,從而得到具體的DNA或RNA序列數據[4]。

3 規?；i場防控措施

3.1 加強規?；i場衛生管理

加強規?；i場衛生管理是控制PCV3病毒的重要措施之一。從入場前管理、日常管理、消毒等幾個方面介紹。入場前管理是防止PCV3病毒登場的重要前提。具體而言,豬入場前需要對購進豬場的情況進行全面了解,包括檢查豬的身體狀況、自然病死情況、疫苗接種情況等,確保入場豬源安全可靠。同時,在入場前也需要進行衛生檢查,對飼養環境進行清潔消毒。此外,還可以采取篩選、檢測等措施,及時發現入場豬的病毒感染狀況,防止病毒擴散。規范的日常管理是預防和控制PCV3病毒傳播的重要手段。具體而言,需要加強飼養環境衛生管理,包括保持飼料、水、飲水系統及飼料生產加工環境的衛生,保持飼養場的通風良好,避免濕度過高或過低,以及定期清理雜物,及時處理糞便。另外,還需要保持適當的飼養密度,減少豬生病的概率。消毒是控制PCV3病毒傳播的重要手段之一。對于規?；i場,消毒工作尤其關鍵,在進行消毒工作時,需要對不同區域和設施進行區分,采用不同的消毒方式。

3.2 建立PCV3病毒監測體系

建立PCV3病毒監測體系是預防和控制PCV3病毒傳播的重要舉措,也是保障豬場安全穩定運行的必要措施。監測內容是PCV3病毒監測體系的基礎和核心。主要包括PCV3病毒的檢測、分型,以及擴散狀況和相關因素等。具體而言,需要對豬場內的豬及與豬場有關的物品、環境等進行持續監測,發現異常情況即時報告和處理。監測方法是PCV3病毒監測體系的技術支撐和保障。建立PCV3病毒監測體系需要綜合運用多種監測手段,包括定量PCR、RT-PCR、測序技術等。此外,還可以在豬場內設置監測設備,通過對空氣中的病毒或顆粒物進行監測。但無論使用哪種監測方法,均需嚴格按照監測程序執行,確保監測結果的準確性和可靠性。監測頻率是PCV3病毒監測體系的重要組成部分。一般情況下,建議定期對豬場的環境、設施等進行監測,監測時間間隔一般為1個月。針對特殊情況,如發現疫情暴發或者疑似情況,則需要加強監測頻率,及時判斷病毒傳播狀態,并及時采取防疫措施。建立檔案是PCV3病毒監測體系的必要步驟,需要將監測記錄、監測結果、監測時間等信息進行統一記錄和歸檔。此外,還需針對監測結論和不同防疫措施進行完整的分析和總結,為后續的防疫措施提供支撐[5]。

3.3 加強病源溯源和追溯工作

加強病源溯源和追溯工作是關鍵措施。溯源和追溯工作需要建立完善的信息平臺和樣本庫,收集相關病例信息和各類病毒樣本,以便快速發現病源,控制疫情的發展。病源溯源和追溯工作過程應注重合作與協調,建立合理的聯合工作機制,加強部門間溝通和信息共享,整合各方力量,形成合力,縮短病源溯源追溯時間。具體措施如下。

1)建立全國性的PCV3病毒樣品及信息庫,對相關管理信息、樣品、物品、人員進行管理并及時更新。

2)加強全行業的防控教育宣傳,以養殖場為主要宣傳對象,宣傳疫情相關知識。

3)開展全行業的實驗室診斷服務,對生豬行業生產主體出現的PCV3病毒疑似或確診病例開展實驗室診斷,加強PCV3病毒的病例管理。

4)加強進口生豬防疫措施,對進口生豬全面篩查,加強進口生豬檢疫,確保生豬產品安全。

5)加強獸醫防疫隊伍建設,開展疫情應急救援行動,做好疫情防控和應急處置工作,提高溯源和追溯的效率。

6)引進先進技術,例如基因測序和病毒檢測技術,對PCV3病毒進行檢測和溯源工作,為及時應對病源提供科學依據。

3.4 完善規?；i場防疫制度及應急處理機制

規?；i場應落實防疫責任人員并制定完備的防疫制度,必須建立可行的監測、檢測、隔離、消毒等多種防疫措施,以有效防止PCV3病毒的傳播,及時發現疫情并對患病豬進行隔離處理。完善應急預案是應對PCV3病毒的必要手段,制定應急預案的前提是開展科學的排查和全面準確的評估,基于實際疫情和現場情況制定應急預案。應急預案應包括如何封鎖和隔離病毒的具體措施以及如何進行安全處置等內容,這樣一旦發生疫情,豬場就可以迅速采取行動,控制擴散并減小對規?；i場的影響。應急預案還需要提高應急響應的協調和指揮效率,確保行動有序、及時和有效進行。

4 結束語

采取規范的防控措施是控制PCV3病毒傳播的前提,規?；i場應嚴格落實防疫責任人員和制定完備的防疫制度,建立科學的防控措施,有效防止疫情的傳播和擴散。完善應急預案是應對PCV3病毒疫情的必要手段,系統制定應急預案,在發生疫情時可以迅速采取行動,控制擴散,減小疫情對規?；i場的影響。健全監管制度也是完善應急處理機制的重要方面,加強對規?；i場疫情的監督和管理,建立健全疫情報告制度和應急考核機制等。通過加強病源溯源和追溯工作、規范防控、完善應急預案、健全監管制度等有效措施,可保障規?；i場的生產經營安全,提高規?；i場應對PCV3病毒的能力,促進生豬產業的健康發展。