基于網絡藥理學探討女貞子治療糖尿病腎病作用機制 *

楊 杰 魏文一 景彩芳 張學蘭 李欽青※

（1.山西中醫藥大學/國家級分子中醫藥學國際聯合研究中心/中醫腦病學山西省重點實驗室，山西 太原 030024；2.山東中醫藥大學藥學院，山東 濟南 250355）

隨著現代人生活條件的改善和環境的變化，糖尿病作為一種慢性代謝性疾病，其發病率逐年增高。據統計［1，2］，2035 年全球糖尿病患者將達6 億，其中30%～40%會進一步發展為糖尿病腎?。―iabetic nephropathy，DN），DN 已成為導致終末期腎臟疾?。‥nd-stage renal disease，ESRD）的重要原因。DN 的發病機制復雜，現代研究［3-7］認為DN 的發生發展與多因素相關，包括遺傳、糖代謝異常、血流動力學異常、炎癥反應、氧化應激等。

中藥女貞子（Ligustri Lucidi Fructus）是木犀科女貞屬植物女貞（Ligustrum lucidumAit）的干燥成熟果實，《本草經疏》中記載其可入腎經，《本草綱目》認為該藥可以養陰益腎。女貞子中含有萜類、黃酮類、苯乙醇苷類，以及一些揮發油、脂肪酸、多糖、氨基酸、微量元素等成分［8］，具有降血糖、降血脂、抗氧化應激［9］等功效。因此，本研究基于網絡藥理學，對女貞子治療DN的機制作初步探討。

1 靶點的篩選

1.1 女貞子成分及作用靶點的篩選 通過網絡藥理學TCMSP（https：//tcmspw.com）平臺檢索女貞子的成分，得到可能的活性成分13個；檢索各成分的作用靶點，經合并、去重、標準化，得到女貞子靶點252個。見圖1。

圖1 女貞子成分-靶點網絡圖

1.2 DN 作用靶點的篩選 使用Drugbank、GeneCards、OMIM 數據庫檢索DN 的作用靶點，通過合并、去重、標準化得到其作用靶點1084個，其中與女貞子交集的靶點116個。見圖2。

圖2 女貞子與DN交集靶點文氏圖

2 蛋白互作分析（PPI）篩選關鍵靶點

將女貞子與DN 的交集靶點導入STRING 數據庫中（https：//cn.string-db.org/）進行分析，得到PPI圖。以連接度值≥2倍中位數為篩選條件，得到關鍵靶點18個，分別 是STAT3、 JUN、 IL-6、 MAPK1、 RELA、 TNF、TP53、AKT1、IL-10、FOS、EGFR、CAV1、ESR1、IL-1β、CREB1、IL-4、MAPK8、STAT1。見圖3。

圖3 女貞子與DN的交集靶點蛋白互作圖

3 基因本體論（GO）富集分析

將女貞子與DN 的交集基因導入Metascape 數據庫中（https：//metascape.org/），分別進行生物過程分析（BP）、細胞成分分析（CC）和分子功能分析（MF），根據P 值從小到大排列，每組選擇前10 條。見圖4。生物過程主要涉及對外界刺激的反應，細胞的運動、代謝等；細胞成分主要是細胞膜區、細胞外基質、囊泡腔等；分子功能主要涉及細胞因子、受體配體結合和調節、轉錄因子、核受體等。

圖4 女貞子-DN交集基因GO富集分析圖

4 京都基因與基因組百科全書（KEGG）富集分析

使用Metascape 數據庫對交集基因進行KEGG 富集分析，按照P 值從小到大排序，選擇前20 條可能與女貞子治療DN 有關的通路。見圖5。得到的通路與晚期糖基化終末產物、粥樣硬化、白介素-17（IL-17）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、低氧誘導因子-1（HIF-1）等相關。

圖5 女貞子作用DN通路圖

5 小結

中藥女貞子具有治療肝腎陰虛、內熱消渴等證的作用，研究［10］證實其對DN也具有一定的效果。本研究基于網絡藥理學對女貞子治療DN 機制作初步探討，PPI 分析得到女貞子治療DN的關鍵靶點18個，其中IL-6、IL-10、IL-4、IL-1β、TNF等因子均能直接參與炎癥反應過程，信號傳導及轉錄激活蛋白（STAT）為介導炎癥的重要靶點［11］，絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）、蛋白激酶B（AKT）也被證實與炎癥密切相關［12］。GO 富集分析結果顯示，生物過程主要體現為對外界刺激的反應、細胞運動等；細胞成分主要與細胞膜和細胞外基質相聯系；分子功能體現為各類細胞因子、轉錄因子等。KEGG 富集分析發現，其中多數與炎癥相關，如IL-17 信號通路、TNF 信號通路、Toll 樣受體信號通路、NF-κB 信號通路、NOD 樣受體信號通路等，均直接、間接引起或促進炎癥反應的發生。尤其是NF-κB 信號通路，它參與多種炎癥因子和相關蛋白翻譯、表達、轉錄等［13］，而與腎臟損傷相關的生長因子、Toll 樣受體、NOD 樣受體等［14］均可激活NF-κB。研究［15-17］證實，女貞子水提液可以抑制NF-κB 的活化，降低小鼠腹腔巨噬細胞的炎性反應；其所含熊果酸能夠降低促炎細胞因子及蛋白激酶α（IKKα）水平，提高NF-κB 抑制蛋白α（IκBα）水平，抑制NF-κB 磷酸化；所含黃酮類物質槲皮素可以抑制NF-κB的翻譯和表達，減輕DN大鼠的炎癥反應。

綜上所述，炎癥反應與DN 的發生、發展密切相關，而NF-κB 通路是炎癥反應中的關鍵通路。實驗結果提示女貞子可能是通過影響NF-κB通路發揮治療DN 的功效，為后續的功效和機制研究提供了理論基礎。